[发明专利]用于大肠杆菌与志贺菌甄别的试剂盒

权利要求书

1.一种特征蛋白在甄别大肠杆菌和志贺菌中的应用，其特征在于，所述特征蛋白为带电尸胺，所述带电尸胺的特征峰质荷比m/z为：103.12 ±0.1；应用时将培养到对数生长期的细菌接种到反应液中，再加入生化试剂，孵育；离心，取上清液点到质谱仪样本靶上，自然干燥后在样本上覆盖基质饱和溶液；采用MALDI-TOF 质谱仪采集数据，根据带电尸胺是否产生特征峰m/z 103.12±0.1进行判断，特征峰m/z 103.12±0.1阳性，待测细菌为大肠杆菌；特征峰m/z 103.12±0.1阴性，待测细菌为志贺菌；

所述反应液为5-10 mg/L磷酸吡哆醛的PBS溶液；所述生化试剂含有质量比为1:1-5的赖氨酸和鸟氨酸；生化试剂与反应液的质量体积比为4-12:1 mg/ml。

2.一种甄别大肠杆菌和志贺菌以及鉴定宋内志贺菌的试剂盒，其特征在于，含有生化试剂、反应液、标准校正液，所述生化试剂中含有赖氨酸和鸟氨酸，二者质量比为1:1-5；所述反应液为 5-10 mg/L磷酸吡哆醛的PBS溶液；生化试剂与反应液的质量体积比为4-12:1mg/ml；

所述试剂盒基于MALDI-TOF MS对待测细菌进行检测，检测结果以待测细菌是否具有带电尸胺的特征峰质荷比m/z为103.12±0.1或带电腐胺特征峰质荷比m/z 为89.10±0.1作为判断标准；所述待测细菌为已知属于大肠杆菌或志贺菌，但不确定具体种属；

当检测到待测细菌具有带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1时，待测细菌为大肠杆菌；

当没有检测到带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1，待测细菌为志贺菌；

当没有检测到带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1，但检测到带电腐胺特征峰m/z 89.10±0.1时，则待测细菌为宋内志贺菌；

当没有检测到带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1，也没有检测到带电腐胺特征峰m/z89.10±0.1时，则待测细菌为志贺菌的A群、B群或C群。

3.一种大肠杆菌和志贺菌的非疾病诊断目的的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将液体培养基培养到对数生长期的待测菌接种到反应液中，待测细菌样品接种到反应液的接种量为接种后的反应液浊度为0.2-1.0麦氏单位化试剂与反应液的质量体积比为4-12:1 mg/ml；

再加入生化试剂，28-42 ℃下孵育1-8小时孵育；所述待测菌为已知属于大肠杆菌或志贺菌，但不确定是大肠杆菌还是志贺菌；

所述反应液为5-10 mg/L磷酸吡哆醛的PBS溶液；所述生化试剂含有质量比为1:1-5的赖氨酸和鸟氨酸；

（2）离心，取上清液点到质谱仪样本靶上，自然干燥后在样本上覆盖基质饱和溶液；

（3）采用MALDI-TOF 质谱仪采集数据，根据带电尸胺和带电腐胺的相应特征峰m/z103.12±0.1、89.10±0.1的出峰情况给出待测细菌的鉴别结果；

当检测到待测细菌具有带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1时，待测细菌为大肠杆菌；

当没有检测到带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1，待测细菌为志贺菌；

当没有检测到带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1，但检测到带电腐胺特征峰m/z 89.10±0.1时，则待测细菌为宋内志贺菌；

当没有检测到带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1，也没有检测到带电腐胺特征峰m/z89.10±0.1时，则待测细菌为宋内志贺菌的A群、B群或C群。

4.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，步骤（1）所述孵育为37℃下孵育4小时。

5.根据权利要求3-4任一所述的鉴别方法，其特征在于，所述质谱仪为MALDI-TOF MS质谱仪，采用反射或线性模式采集数据，采集范围为0-200 Da，调整总采集频次使谱图总强度大于10000；采用标准校正液质控校正仪器，使质量偏差小于300ppm。

6.一种非疾病诊断目的的鉴定宋内志贺菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将液体培养基培养到对数生长期的待测细菌样品接种到反应液中，待测细菌样品接种到反应液的接种量为接种后的反应液浊度为0.2-1.0麦氏单位化试剂与反应液的质量体积比为4-12:1 mg/ml；

再加入生化试剂，28-42 ℃下孵育1-8小时孵育；所述待测细菌已知属于大肠杆菌或志贺菌，但不确定具体属种；

所述反应液为5-10 mg/L磷酸吡哆醛的PBS溶液；所述生化试剂含有质量比为1:1-5的赖氨酸和鸟氨酸；

（2）离心，取上清液点到质谱仪样本靶上，自然干燥后在样本上覆盖基质饱和溶液；

（3）采用质谱仪采集数据，根据带电荷尸胺和腐胺的相应特征峰m/z 103.12±0.1、89.10±0.1的出峰情况给出待测细菌的鉴别结果；

当没有检测到带电尸胺特征峰m/z 103.12±0.1，但检测到带电腐胺特征峰m/z 89.10±0.1时，则待测细菌为宋内志贺菌。