[发明专利]化学发光免疫磁球及其制备方法

权利要求书

1.一种化学发光免疫磁球的制备方法，其特征在于，所述化学发光免疫磁球由表面化学修饰有对苯磺酰化基团的磁性微球，同抗原或抗体偶联所得；所述制备方法包括以下步骤：

S1、聚合以获得表面具有多孔结构的聚苯乙烯的乳胶粒子；

S2、将S1步骤得到的乳胶粒子与亚铁盐的水溶液混合，通过原位还原法制备磁性复合体；

S3、将磁性复合体经羟基化改性，得到羟基化磁性微球；

S4、将羟基化磁性微球与对甲苯磺酰氯反应，即得到对甲苯磺酰化磁性微球；

S5、于氨水环境下，将所述对甲苯磺酰化磁性微球与抗原或抗体混合，反应6~8h，得到所述化学发光免疫磁球；

所述S1步骤包括以下步骤：

S11、种子乳液的制备

取乳化剂、蒸馏水、单体有机相和引发剂聚合得到种子乳液；取乳化剂和二次蒸馏水混合于烧瓶中，搅拌使其溶解，用0.1M碳酸氢钠调节反应体系pH值为7.0~8.0；滴加单体有机相，滴加完后，高速搅拌乳化15min，形成白色均一不分层的乳液；往瓶内通氮气5min；升温至60℃~80℃之间，降低搅拌速度到200～220r/min，取引发剂，在30min内缓慢匀速滴入烧瓶瓶内，引发剂滴完后，继续保温15min，制得种子乳液；单体有机相:水:乳化剂:引发剂的体积配比为100:(500~1500):(1~3):(1~5)；其中，乳化剂的配制：称取0.45g的十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶解于9mL二次蒸馏水中，配成5%(w/v)的水溶液；引发剂的配制：称取0.05g的过硫酸钾（KPS）溶解于1mL二次蒸馏水中，配成5%(w/v)的水溶液；单体有机相的配制：将苯乙烯、丙烯酸2-乙基己基酯和二甲基丙烯酸乙二醇酯混合均匀，再加入致孔剂混合制成单体有机相；其中，致孔剂选自甲苯、邻苯二甲酸二辛酯DOP、环己醇、正丁醇、十六醇或十二醇中的一种；苯乙烯、丙烯酸2-乙基己基酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯和致孔剂的体积配比为(10~12):2:2:(0.1~0.5)；

S12、单体的预乳化

将乳化剂与单体有机相混合，充分搅拌至体系呈现稳定的乳液，即得到单体的预乳化液；乳化剂:单体有机相的体积配比为1:(2~4)；

S13、乳胶粒子的制备

于60℃~80℃之间，将引发剂和单体的预乳化液同时滴入到种子乳液中；升高温度至84~86℃熟化处理1h；降低温度至40~45℃，调节pH呈弱碱性，得到乳液；将所得乳液过筛，即可得到粒径大小为200~500nm的聚苯乙烯的乳胶粒子；

所述S2步骤包括：

于氮气氛围中，取聚苯乙烯乳胶粒子的悬浮液、氯化亚铁溶液和醋酸铵溶液混合于三口烧瓶中，搅拌混合液并升温至70℃，用氨水将混合液的pH值调到7.0~7.2；通过恒压滴液漏斗往反应液中缓慢均匀滴加15mL亚硝酸钠溶液，于1小时左右滴加完毕，保持反应温度在70℃，整个反应过程无氧氛围，并维持反应液的pH值在7.0～7.2之间，反应完后，冷却至室温，抽滤，用去离子水在超声波清洗机里反复洗涤反应产物5次，每次60s，最后置于真空干燥箱中40℃烘干24h，得到磁性复合体；

所述S3步骤包括以下步骤：

S31、磁性复合体与端环氧基聚硅氧烷混合，在冰浴并搅拌条件下，匀速滴加冰醋酸，滴加完毕后，搅拌反应3小时；其中磁性复合体与端环氧基聚硅氧烷的混合比例为(3~6)g:50ml；

S32、将反应产物抽滤，先依次用去离子水、甲醇、去离子水洗涤三次，再用0.1M NaHCO₃溶液洗涤5次，得到表面SiO₂包裹环氧基的磁性微球，干燥后用0.1M NaHCO₃稀释成含有表面SiO₂包裹环氧基的磁性微球5%(w/w)的悬浮液；

S33、加入巯基乙醇于步骤S32得到的悬浮液中，震荡反应10分钟后，300mL0.1M NaHCO₃溶液洗涤3次，再用去离子水洗涤5次，得到羟基化磁性微球；巯基乙醇:表面SiO₂包裹环氧基的磁性微球的配比为(2~3)g:5mL；

所述S4包括如下步骤：

S41、用丙酮溶液置换储存羟基化磁性微球的缓冲体系，并调节pH呈弱碱性，冷却至-2~8℃，得到羟基化磁性微球的丙酮悬浮液；

S42、向丙酮悬浮液中滴加对甲苯磺酰氯，搅拌，反应完成后，抽滤，依次用丙酮和去离子水洗涤至中性，即可得到对甲苯磺酰化磁性微球。