[发明专利]一种紫灯片HPLC指纹图谱建立方法

说明书

本发明公开了一种紫灯片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，该方法包括：步骤1供试品溶液的制备；步骤2对照品溶液的制备；步骤3色谱条件：ODS Csubgt;18/subgt;(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相A为乙腈；流动相B为水溶液；检测波长203nm；柱温：20℃；流速：1.0mlsupgt;./supgt;minsupgt;‑1/supgt;；步骤4测定，得到紫灯片的指纹图谱。本发明还对该指纹图谱的建立方法进行了方法学验证。本发明测定的紫灯片指纹图谱，精密度高，稳定性好，重复性好，相似度高，能够有效地控制紫灯片的质量，确保产品质量的均一稳定，进而保证产品的安全有效。

技术领域

本发明涉及中药制剂质量控制方法，具体涉及一种用高效液相色谱法对紫灯片制剂指纹图谱的建立方法，以及由此方法得到的紫灯片指纹图谱。

背景技术

紫灯片处方由灯盏细辛、紫丹参、三七、葛根和甘草五味中药组成，其中三七为五加科植物三七Panax notonginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎，为《中国药典》标准收载。主要有效成分为人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等皂苷类化合物，具有散瘀止血，消肿定痛等药理作用。紫灯片具有温经散寒，益气活血，解痉止痛的功效，用于治疗颈椎病。

中药指纹图谱是从中药物质基础的角度出发，运用现代分析测试技术，得到能够表征中药材或中成药特征的光谱图或色谱图。中药指纹图谱可全面反映中药所含有内在化学成分的种类与数量，进而反映中药的质量，尤其是在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采用中药指纹图谱的方式，将有效地表征中药质量。中药指纹图谱在中药整体质量控制方面的优势已获得业界人士的广泛认可，国际上也多采用指纹图谱对植物药进行质量控制。

建立紫灯片的指纹图谱，对于紫灯片的质量控制，提高紫灯片质量标准以及用药安全将具有重要意义。

目前，以指纹图谱控制紫灯片的质量，尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种紫灯片HPLC指纹图谱的建立方法。其步骤是将紫灯片制备成供试品溶液，经高效液相色谱法对紫灯片进行分析检测，获得紫灯片HPLC指纹图谱，从而为紫灯片的内在质量评价提供有力支撑依据。

本发明提供了一种紫灯片HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

步骤1、供试品溶液的制备：精密称取紫灯片内容物1g，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇25～50ml，称重，回流提取2～3小时，取出，放冷，用水饱和的正丁醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液15～25ml，置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并浓缩至10～15ml，用微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；

步骤2、对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品各5～15mg，分别置50ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得对照品溶液；

步骤3、色谱条件：ODS C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相A为乙腈，流动相B为水溶液，进行梯度洗脱；检测波长203nm；柱温：10～30℃；流速：1.0ml·min^-1；进样量：10μl；

前述方法的梯度洗脱程序的体积比浓度为：

洗脱时间                 流动相A的比例        流动相B的比例

0min                     10％                 90％

15min                    19％                 81％

30min                    33％                 67％