[发明专利]一种菊花中五种重要药用成分含量的UPLC-MS/UV检测方法

权利要求书

1.一种对菊花中式I-式V所示化合物进行含量测定的方法，包括：

1)将菊花整朵摘下，烘干，磨碎，得到磨碎后的菊花样品，加入提取剂，超声，离心，收集上清液过滤，得到提取液；

2)用液相色谱和质谱联用的方法，对步骤1)所得提取液中式I-式V所示化合物的含量进行定量分析，完成所述菊花中式I-式V所示化合物的含量测定；

所述式I-式V的结构式如下：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)烘干步骤中，烘干方法为蒸青烘干法；

所述磨碎步骤中，磨碎后的目数为60-80目；

所述提取剂由甲醇和水组成；

所述磨碎后的菊花样品与提取剂的用量比100mg：5ml；

所述超声提取步骤中，超声功率为200-400W；超声时间为30-50min；温度为20-25℃；

所述离心步骤中，离心转速为4000-6000rpm；时间为10-20min；温度为2-8℃；

所述收集上清液过滤中，滤膜为有机滤膜；滤膜孔径为0.20-0.45μm。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)液相色谱检测的条件如下：

色谱柱类型：AQUITY UPLC HSS T3；

色谱柱参数：2.1mm×100mm i.d.,1.8μm；

流动相A：甲醇；

流动相B：体积浓度百分比为0.1％的甲酸水溶液；

等度洗脱程序为：流动相A体积比例为55％，流动相B体积比例为45％；

流速：0.20ml/min；

柱温：30℃；

自动进样器温度：20℃；

进样体积：1μl；

洗针液进样后清洗6s。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤2)质谱检测的条件如下：

质谱为正离子模式；

质子源：ESI离子源；

毛细管电压：5.0kV；

离子源温度：150℃；

脱溶剂气温度：650℃；

脱溶剂气流速：650L/h；

锥孔电压：50V；

质谱离子采集范围为260m/z到520m/z。

光谱条件：紫外检测器波长为320nm。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述式I所示化合物的UV保留时间为1.28min；MS保留时间为1.42min；

所述式II所示化合物的UV保留时间为1.53min；MS保留时间为1.58min；

所述式III所示化合物的UV保留时间为1.90min；MS保留时间为2.00min；

所述式IV所示化合物的UV保留时间为5.34min；MS保留时间为5.50min；

所述式V所示化合物的UV保留时间为8.03min；MS保留时间为8.17min。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述步骤2)定量分析中，定量方法为外标法；

所述式I所示化合物的线性范围为19.5-2500μg/mL；

标准曲线为y＝43.54x+2.34；其中，y为峰面积；x为浓度值，单位为μg/mL；

所述式II所示化合物的线性范围为19.5-2500μg/mL；

标准曲线为y＝53.94x+177.81；其中，y为峰面积；x为浓度值，单位为μg/mL；

所述式III所示化合物的线性范围为5.8-1500μg/mL；

标准曲线为y＝23.77x+29.53；其中，y为峰面积；x为浓度值，单位为μg/mL；

所述式IV所示化合物的线性范围为2.4-1250μg/mL；

标准曲线为y＝41.03x+0.11；其中，y为峰面积；x为浓度值，单位为μg/mL；

所述式V所示化合物的线性范围为0.1-25μg/mL；

标准曲线为y＝140.16x+2.10；其中，y为峰面积；x为浓度值，单位为μg/mL。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述菊花选自亳菊、白菊和黄菊中至少一种；具体选自亳州小亳菊、温县怀小白菊和温县怀小黄菊中至少一种。