[发明专利]一种口蹄疫病毒致弱突变株及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202010877384.0 | 申请日： | 2020-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN111944770B | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 卢曾军;刘在新;李平花;袁红;张杰;白兴文;孙普;包慧芳;李娜 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/04 | 分类号： | C12N7/04;C12N7/00;A61K39/135;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 薛红凡 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 口蹄疫病毒 突变 及其 制备 方法 应用 | ||
1.口蹄疫病毒致弱突变株，其特征在于，在O型口蹄疫病毒前导蛋白基因基础上将Lb基因中起始密码子AUG突变为ATC或AAA。
2.根据权利要求1所述口蹄疫病毒致弱突变株，其特征在于，突变为ATC的前导蛋白基因的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示。
3.根据权利要求1所述口蹄疫病毒致弱突变株，其特征在于，突变为AAA的前导蛋白基因的核苷酸序列为SEQ ID No.4所示。
4.根据权利要求1所述口蹄疫病毒致弱突变株，其特征在于，所述前导蛋白基因的核苷酸序列为SEQ ID No.5所示。
5.根据权利要求1所述口蹄疫病毒致弱突变株，其特征在于，O型口蹄疫减毒病毒株是在OZK/93-08病毒株的基础上，将前导蛋白基因Lb起始密码子AUG突变为ATC或AAA。
6.权利要求1～5任意一项所述口蹄疫病毒致弱突变株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将含口蹄疫病毒的全长cDNA的重组质粒进行点突变，得到突变后的重组质粒，将突变后的重组质粒侵染细胞进行拯救，得到拯救的病毒株。
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述点突变用引物为ATC-F/ATC-R引物对和AAA-F/AAA-R引物对；
所述ATC-F的核苷酸序列为SEQ ID No.8所示；
所述ATC-R的核苷酸序列为SEQ ID No.9所示；
所述AAA-F的核苷酸序列为SEQ ID No.12所示；
所述AAA-R的核苷酸序列为SEQ ID No.13所示。
8.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述点突变所用的PCR扩增程序为94℃预变性5min后，98℃20min，68℃1min/1kb，35个循环后，72℃10min。
9.权利要求1～5任意一项所述口蹄疫病毒致弱突变株在制备口蹄疫疫苗中的应用。
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