[发明专利]杂交瘤细胞株及其制备方法和应用、单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种杂交瘤细胞株及其制备方法和应用、单克隆抗体及其应用。该杂交瘤细胞株的保藏号为GDMCC No：61044或者该杂交瘤细胞株的保藏号为GDMCC No：61043。上述杂交瘤细胞株能够分泌与胰岛素特异性结合的胰岛素抗体，该胰岛素抗体能够用于制备灵敏度高、特异性强、稳定性好的胰岛素检测试剂盒。用本研究提供的胰岛素抗体研制的检测试剂盒，可精确检测待测样品中胰岛素，与市售试剂盒检测结果高度相关，与临床诊断具有较高诊断一致性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种杂交瘤细胞株及其制备方法和应用、单克隆抗体及其应用。

背景技术

胰岛素（INS）是胰岛β细胞合成和分泌的一种多肽类激素，由21个氨基酸构成的A链和30个氨基酸构成的B链，以两个双硫链相连组成，相对分子质量为5734D，是机体内唯一的降糖激素，其与机体能量代谢密切相关，并参与机体细胞生长、发育、增殖、分化等调控。

INS基因存在于所有细胞，并在这些细胞具有相同的拷贝和同样的结构，但只在胰岛β细胞高度特异地表达。在胰岛β细胞的细胞核中，第11对染色体短臂上胰岛素基因区DNA向mRNA转录，mRNA从细胞核移向细胞浆的内质网，转译成由110个氨基酸残基构成的前胰岛素原。前胰岛素原经过蛋白水解作用除其前肽，生成86个氨基酸组成的长肽链-胰岛素原（Proinsulin）。胰岛素原随细胞浆中的微泡进入高尔基体，经蛋白水解酶的作用，切去31、32、60三个精氨酸连接的链，断链生成没有生理活性的C肽，同时生成胰岛素，分泌到B细胞外，进入血液循环中。未经过蛋白酶水解的胰岛素原，一小部分随着胰岛素进入血液循环，胰岛素原的生物活性仅有胰岛素的5%。

胰岛素的检测在临床中主要应用于糖尿病诊断、分型，可以判定糖尿病患者是I型患者还是II型患者。主要适合于没有使用胰岛素治疗的患者，可在空腹及餐后2小时抽血进行测定，正常情况下空腹胰岛素水平应该为5μIU/mL～30μIU/mL，而餐后水平应比空腹高出4倍～5倍。如果胰岛素水平明显降低，就称之为绝对缺乏，可见于I型糖尿病；如果并没有明显减少，而表现为血糖升高，就称为相对缺乏，是因为胰岛素发挥作用的环节出现故障，常见于存在胰岛素抵抗的II型糖尿病。

近几年，胰岛素含量检测多采用免疫测定法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，包括酶联免疫吸附法、免疫层析法法、免疫透射比浊法、时间分辨荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法等。所有这些免疫学方法，都需要以胰岛素单克隆抗体为前提条件，对制备的抗体的性能要求很高。然而，现有的胰岛素单克隆抗体的性能较差，导致胰岛素检测结果不够准确。

发明内容

基于此，本申请提供一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株能够分泌胰岛素单克隆抗体，且采用分泌的胰岛素单克隆抗体对胰岛素进行检测的准确性较高。

此外，本申请还提供一种杂交瘤细胞株的制备方法和杂交瘤细胞株的应用、单克隆抗体及其应用。

一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏号为GDMCC No：61044或者所述杂交瘤细胞株的保藏号为GDMCC No：61043。

上述杂交瘤细胞株能够分泌亲和力较高的胰岛素单克隆抗体，有利于提高胰岛素检测的准确性，能够为胰岛素免疫检测提供关键原料，对于扩大其临床应用，降低成本，具有重要意义。经试验验证，将上述杂交瘤细胞株分泌的胰岛素单克隆抗体制备成胰岛素检测试剂盒，采用该胰岛素检测试剂盒对胰岛素进行检测的准确度在0.900~1.100范围内，具有较高的准确性。

一种单克隆抗体，由上述杂交瘤细胞株分泌。

在其中一个实施例中，所述单克隆抗体能够识别多肽片段，所述多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：3或者SEQ ID NO：4所示。

一种杂交瘤细胞株的制备方法，包括如下步骤：

采用胰岛素原免疫小鼠，获得免疫后的小鼠；及