[发明专利]一种长效重组犬干扰素制品及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种长效重组犬干扰素制品及制备方法和应用，其特征在于，所述方法包括将犬α‑干扰素基因通过linker与犬SETD2基因连接形成编码CaIFN‑α‑SETD2的融合基因，将所述CaIFN‑α‑SETD2的融合基因经酶切、连接，导入大肠杆菌，得到重组表达菌，所述重组表达菌可诱导表达CaIFN‑α‑SETD2融合蛋白。本发明的试验证明：本发明制备的长效重组犬干扰素制品是一种高效、长效、广谱的抗犬病毒类药物制品，其是通过犬干扰素基因和SETD2蛋白进行融合表达，一方面提高干扰素蛋白分子量，延长了干扰素制品的半衰期，同时融合蛋白中的SETD2也在干扰素抗病毒免疫过程中起到正向调节作用，增强了干扰素抗病毒能力。

技术领域

本发明涉及生物疫苗制备技术领域，具体涉及一种长效重组犬干扰素制品及制备方法和应用。

背景技术

干扰素(interferon，IFN)是1957年英国和瑞士科学家在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时发现的一种细胞因子，并根据其可干扰病毒的复制而命名。干扰素家族主要分为三个亚家族：即Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)、Ⅱ型干扰素(IFN-Ⅱ)、Ⅲ型干扰素(IFN-Ⅲ)。其中，Ⅰ型干扰素是参与抗病毒免疫的重要效应细胞因子，由宿主天然免疫细胞在识别病毒后产生并分泌，包括IFN-α(13种亚型)、IFNβ、IFNε、IFNτ、IFNκ、IFNω、IFNδ和IFNζ等多种类型。

Ⅰ型IFN-α/β主要在病毒、双链RNA、多肽、细菌脂多糖以及细胞因子的诱导下由成纤维细胞、淋巴细胞及浆细胞样树突状细胞产生。其发挥抗病毒功能主要通过诱导细胞内JAK-STAT信号活化并激活干扰素诱导基因(IFN-stimulated gene,ISG)表达来实现。IFN主要通过与细胞膜上的相应受体(IFNAR)结合来激活细胞内的酪氨酸激酶JAK家族，首先催化JAK1和TYK2发生磷酸化；JAK1和TYK2是结合在IFNAR胞内段的激酶，JAK家族被激活的激酶反过来再使IFN受体酪氨酸残基发生磷酸化。IFN-α/β黏附STAT1-STAT2二聚体和干扰素调节因子9，形成干扰素刺激基因因子3(ISGF3)，转位进入细胞核与存在于IFN-α/β诱导基因启动子或增强子中的干扰素刺激应答元件(interferon-stimulated response element)顺式作用元件结合，调控相关基因的表达。最终实现其抗病毒免疫反应。不同种类IFN的诱导因素不同，所结合的受体种类及其详细的信号转导途径也不尽相同。IFN可诱导数百种ISG产物来抑制许多不同家族的RNA和DNA病毒。而这些产物中有部分直接具有抗病毒活性，还有部分则参与对其他有抗病毒活性部分ISG的调节，ISG编码的蛋白在病毒感染宿主的不同阶段发挥着抗病毒功能。

组蛋白甲基转移酶SETD2，由2564个氨基酸组成，分子量约300kDa。成熟的SETD2蛋白主要是由6个亚单位组成：(1)AWS结构域(2)SET结构域(3)PostSET结构域(4)Asp-B-Hydre_N结构域(5)C-端的WW结构域(6)SRI结构域。6个亚单位中，与功能相关的结构域是位于C末端的WW及SRI结构域和中间的SET结构域。SETD2是IFN-α介导的抗病毒免疫过程中的一个关键的正向调节因子。SETD2同时通过翻译后修饰和表观遗传修饰两种机制共同介导IFN信号通路的调控，SETD2通过其具有甲基转移酶活性的SET结构域促进IFN-α下游STAT1的第525位赖氨酸发生单甲基化修饰，进而促进JAK1与STAT1的相互作用，增强JAK1介导的STAT1的磷酸化修饰，促进STAT1的磷酸化激活，增强其与DNA结合能力，上调抗病毒基因ISGs的表达。同时，SETD2也直接参与调控一些ISGs基因启动子远端的区域具有转录活化标志的H3K36me3的修饰，进一步促进并维持基因的转录，从而促进IFN的抗病毒免疫反应。综上，亟待研发一种长效重组犬干扰素制品及其制备方法与应用。

发明内容

为此，本发明提供一种长效重组犬干扰素制品及制备方法和应用。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：