[发明专利]一种兔免疫球蛋白的生产工艺

权利要求书

1.一种兔免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：

1）兔血清，辛酸沉淀，过滤，取滤过液；

2）亲和层析：用pH 7.0-7.4的磷酸盐缓冲液稀释至蛋白含量不高于5g/L，上亲和层析柱，用pH 3.5-4.0的醋酸钠缓冲液洗脱，收集洗脱组分；所用的亲和层析填料是Protein A或Protein G配基亲和填料；

3）阴离子交换层析：调节步骤2）洗脱组分的pH至5.0-5.5，过离子交换柱，加pH5.5的醋酸钠缓冲液洗涤，收集流穿洗涤混合液；

4）抗A/抗B层析：按1:1比例混合Eshmuno PAnti-A和Eshmuno PAnti-B亲和凝胶作为层析填料，阴离子交换层析流穿洗涤混合液用含50-80mM NaCl的、pH为4.8-5.2的柠檬酸缓冲液超滤浓缩至蛋白含量25-35 g/L，调pH至4.8-5.2，上样，收集流穿组分；所述工艺还包括如下步骤：

5a）混合液超滤浓缩至蛋白含量为35-45g/ L，用磷酸调pH至3.4-4.0，再纳米膜过滤，pH 3.4-4.0下孵放2h；或，

5b）混合液超滤浓缩至蛋白含量为35-45g/ L，用磷酸调pH至3.4-4.0，孵放2h，再经纳米膜过滤。

2.如权利要求1所述的生产工艺，其特征在于：步骤2）为：用7.4的磷酸盐缓冲液稀释至蛋白含量1g/L，上亲和层析柱，用pH 3.5的醋酸钠缓冲液洗脱，收集洗脱组分。

3.如权利要求1所述的生产工艺，其特征在于：步骤2）的磷酸盐缓冲液的磷酸盐浓度为20mM；和/或，所述醋酸钠缓冲液中醋酸钠的浓度是50mM。

4.如权利要求1~3任一所述的生产工艺，其特征在于：步骤3）为：调节步骤2）洗脱组分的pH至5.0，过离子交换柱，加pH5.5的醋酸钠缓冲液洗涤，收集流穿洗涤混合液。

5.如权利要求1~3任一所述的生产工艺，其特征在于：步骤3）所述醋酸钠缓冲液中醋酸钠的浓度为20mM。

6.如权利要求1~3任一所述的生产工艺，其特征在于：步骤4）中柠檬酸缓冲液中NaCl含量为80 mM。

7.如权利要求1~3任一所述的生产工艺，其特征在于：步骤4）中调pH至5.0。