[发明专利]一种兔免疫球蛋白的生产工艺

说明书

本发明公开了一种免疫球蛋白的生产工艺，属于生物制品领域，尤其涉及免疫球蛋白的生产工艺领域。其是用SPF兔血清灭活补体后，经辛酸沉淀过滤得到澄清液；并将澄清液依次通过以下层析：亲和层析、阴离子交换层析、抗A/抗B层析，能最终获得收率和纯度均较高的免疫球蛋白产品。

技术领域

本发明属于生物制品领域，尤其涉及免疫球蛋白的生产工艺领域。

背景技术

免疫球蛋白是具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，可分为分泌型和膜型。前者主要存在于血液及组织液中，具有抗体的各种功能；后者构成B细胞膜上的抗原受体。生物制品领域中，免疫球蛋白通常指的是分泌型免疫球蛋白。

免疫球蛋白对机体免疫极其重要，其不仅能中和毒素、阻断病原体入侵，还能在结合特异性抗原(通常是病原体)后，通过激活补体及与靶细胞表面Fc受体结合，发挥调理作用、ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用)、介导超敏反应等作用。免疫球蛋白因此常用于提高病人的免疫力。

兔免疫球蛋白是从兔血清中制备得到的免疫球蛋白产品。其制备过程中需要用辛酸-硫酸铵盐析纯化，再用人源吸附材料(人红细胞、人血小板、人胎盘组织、人血浆等)吸附杂抗体，再用DEAE-Sephadex A-50色谱纯化制备(《中国药典》2015版，第三部)。

硫酸铵是环保限制用化学品，会产生不可忽视的环保压力；人源吸附材料可能携带外源病毒，增加产品的使用风险。但省略硫酸铵沉淀或人源吸附材料则难以保证产品质量，例如导致：纯度不高，IgG单体和二聚体的总的(IgG单体+二聚体)比例不高，A/B血凝素抗体效价超过药典要求标准等。

目前，市售兔免疫球蛋白产品中免疫球蛋白纯度为90％～95％，IgG单体+二聚体比例仅为90％左右。质量有待进一步提高。

兔免疫球蛋白的生产工艺需要改进。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种方法环保、产品安全且高质量的兔免疫球蛋白的生产工艺。

本发明的技术方案如下：

一种兔免疫球蛋白的生产工艺，包括以下步骤：

1)取兔血清，辛酸沉淀，过滤，取滤过液；

2)亲和层析：用pH 7.0-7.4的磷酸盐缓冲液稀释至蛋白含量不高于5g/L，上亲和层析柱，用pH 3.5-4.0的醋酸钠缓冲液洗脱，收集洗脱组分；

3)阴离子交换层析：调节步骤2)洗脱组分的pH至5.0-5.5，过离子交换柱，加pH5.5的醋酸钠缓冲液洗涤，收集流穿洗涤混合液；

4)抗A/抗B层析：按(1-2)∶(2-3)比例混合Eshmuno PAnti-A和Eshmuno PAnti-B亲和凝胶作为层析填料，阴离子交换层析流穿洗涤混合液用含50-80mM NaCl的、pH为4.8-5.2的柠檬酸缓冲液超滤浓缩至蛋白含量25-35g/L，调pH至4.8-5.2，上样，收集流穿组分。

如前述的生产工艺，所述工艺还包括如下步骤：

5a)混合液超滤浓缩至蛋白含量为35-45g/L，用磷酸调pH至3.4-4.0，再纳米膜过滤，pH 3.4-4.0下孵放2h；或，

5b)混合液超滤浓缩至蛋白含量为35-45g/L，用磷酸调pH至3.4-4.0，孵放2h，再经纳米膜过滤。

如前述的生产工艺，步骤2)为：用7.4的磷酸盐缓冲液稀释至蛋白含量1g/L，上亲和层析柱，用pH 3.5的醋酸钠缓冲液洗脱，收集洗脱组分。

如前述的生产工艺，步骤2)的磷酸盐缓冲液的磷酸盐浓度为20mM；和/或，所述醋酸钠缓冲液中醋酸钠的浓度是50mM。