[发明专利]一种氯吡格雷用药基因检测试剂盒及使用方法

说明书

本发明提供一种氯吡格雷用药基因检测试剂盒，包括用于检测CYP2C19基因的引物对、探针和抑制剂，PCR反应液、阳性质控品、阴性质控品，所述引物对具体检测的是CYP2C19基因的rs4244285位点和rs4986893位点的多态性。本发明还提供了一种氯吡格雷用药基因检测试剂盒的使用方法。解决了基因检测试剂盒检测周期长、操作复杂、成本高和特异性不强等问题。

技术领域

本发明应用于基因检测技术领域，具体涉及一种氯吡格雷用药基因检测试剂盒及使用方法。

背景技术

氯吡格雷是一种噻吩并吡啶衍生物，可有效地用于抗血小板治疗，在动脉血栓形成风险患者的二级预防中占有重要地位。它是一个前体药物，在体外无抗血小板活性，必须在肝脏内通过细胞色素P450酶(CYP450酶)代谢成活性代谢产物才能发挥作用，其中CYP2C19占主要地位，被认为是影响氯吡格雷反应差异的独立因素，是当下的研究热点。常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中，即代谢不良者，产生活性代谢产物减少，抗血小板聚集作用下降，血栓风险增加；而超快代谢型的患者，活性代谢产物生成增加，抗血小板聚集作用增强，出血风险增加。

CYP2C19的等位基因很多，但在不同的人群中所占比例比较稳定并且表达较高的有4个，*1、*2、*3和*17，有研究显示，携带CYP2C19突变基因(CYP2C19*2、CYP2C19*3)患者主要不良心血管事件发生率较非携带者显著增加，CYP2C19*2、CYP2C19*3任何一种突变都会使编码蛋白合成提前终止而降低该酶活性，使之丧失活化氯吡格雷的能力，从而引起较高的支架内血栓形成等不良心血管事件发生的风险。

目前针对基因多态性检测的技术有很多，最常用的有聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP法)、序列特异性PCR、一代测序、二代测序和基因芯片法等技术，但是这些技术有各自的应用缺陷，有的操作繁琐，检测周期长，无法进行高通量多位点同时检测，使得目前在临床上对于多态性检测技术应用仍不理想，一直无法满足临床检测需求。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的检测CYP2C19基因多态性时对样本处理要求高、检测周期长、操作复杂、成本高和特异性不强等问题，提供一种氯吡格雷用药基因检测试剂盒及使用方法。本试剂盒具有高灵敏度、低成本、高特异性、操作简便、检测周期短等特点，可以快速精准的对氯吡格雷个体化用药基因多态性进行检测。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案实现的：

一种氯吡格雷用药基因检测试剂盒，包括用于检测CYP2C19基因的引物对、探针和抑制剂，PCR反应液、阳性质控品、阴性质控品，所述引物对具体检测的是CYP2C19基因的rs4244285位点和rs4986893位点的多态性。

进一步的，用于检测CYP2C19基因的引物对、探针和抑制剂包括：

用于检测CYP2C19*2(681GA)待测位点的引物对、探针和抑制剂：

P227P-WF:CCACTATCATTGATTATTTCCCG SEQ IQ NO.1

P227P-MF:CCACTATCATTGATTATTTCCCA SEQ IQ NO.2

P227P-R:TTCTCCATTTTGATCAGGAAGCAAT SEQ IQ NO.3

P227P-P:FAM-CCATAACAAATTACTTAAAAACCTTGCTT-TRAMA SEQ IQ NO.4

P227P-WB:CCACTATCATTGATTATTTCCCAGGAACC-ddC SEQ IQ NO.5

P227P-MB:CCACTATCATTGATTATTTCCCGGGAACC-ddC SEQ IQ NO.6；