[发明专利]一种多功能干细胞培养方法及所用培养基

权利要求书

1.一种多功能干细胞培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计，包括：转铁蛋白0.6μg/mL，干细胞生长因子7μg/mL，表皮细胞生长因子2μg/mL，L-谷胱甘肽25μg/mL，细胞保护剂0.3μg/mL，生长诱导剂0.6μg/mL，天冬氨酸6μg/mL，柠檬酸铁34ng/mL，胰岛素13μg/mL，泛酸0.9μg/mL；所述基础培养基为DMEM培养基；所述细胞保护剂由D-海藻糖和羟乙基淀粉按质量比2:13组成；所述生长诱导剂由壳寡糖、胆酸钠和丹皮酚按质量比10:5:1组成；所述壳寡糖的分子量为3000。

2.一种培养多功能干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在培养瓶中加入权利要求1所述的多功能干细胞培养基，以一定的接种密度将多功能干细胞接种在上述培养瓶中，振荡培养瓶使细胞均匀悬浮，振荡速度为50-100r/min，于温度为37℃、湿度为95％、相对体积分数为5％的CO₂培养箱中进行培养，每天换一次培养基；

(2)培养5-6天后，离心，离心速度为600-1000r/min，离心时间为4-8min，弃上清液，加入pH值为7.4的PBS缓冲液清洗细胞聚集体，离心，离心速度为600-1000r/min，离心时间为3-6min，弃上清液后加入胰蛋白酶，室温消化5-8min，终止消化。

3.如权利要求2所述的培养多功能干细胞的方法，其特征在于，所述步骤(1)中以3×10⁵个/mL-1×10⁶个/mL的接种密度将多功能干细胞接种在上述培养瓶中。