[发明专利]一种多功能干细胞培养方法及所用培养基

说明书

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种多功能干细胞培养方法及所用培养基。本发明多功能干细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计，包括：转铁蛋白0.5‑0.8μg/mL，干细胞生长因子5‑8μg/mL，表皮细胞生长因子1‑3μg/mL，L‑谷胱甘肽23‑26μg/mL，细胞保护剂0.2‑0.4μg/mL，生长诱导剂0.4‑1μg/mL，天冬氨酸5‑8μg/mL，柠檬酸铁32‑40ng/mL，胰岛素10‑15μg/mL，泛酸0.5‑1.5μg/mL。本发明提供的多功能干细胞培养基组成明确，培养后所得多功能干细胞的纯度高，细胞增殖能力强，不损害多功能干细胞的分化能力。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种多功能干细胞培养方法及所用培养基。

背景技术

干细胞即为起源细胞。简单来讲，它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，具有较高的端粒酶活性。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞(Embryonic stem cell)的发育等级较高，是全能干细胞(Totipotent stem cell)，而成体干细胞的发育等级较低，是多能干细胞或单能干细胞。据文献报导干细胞是一类具有自我更新和分化潜能并保持未分化状态的细胞。它包括胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。

多功能干细胞是利用成体皮肤细胞“重编程”为类似具有胚胎干细胞功能的细胞，它具有形成个体内所有类型细胞的多向分化潜能和不断自我更新的特性，这在细胞替代治疗、基因治疗、发育生物学研究、药理及毒理学等领域的研究中有着独特的利用价位和优势。然而，目前现有的多功能干细胞培养基大多含有血清，存在动物来源的病原体污染，如果使用含有动物血清的培养基培育出来的细胞，会存在人体异源体排斥和冲突，这会降低多功能干细胞在应用上的安全性。而且现有的多功能干细胞培养基还存在细胞增殖的速度慢，不易于获得大量多功能干细胞，且所得多功能干细胞的纯度不理想等问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种多功能干细胞培养方法及所用培养基。本发明提供的多功能干细胞培养基组成明确，且全程无动物外源性成分污染，采用本发明多功能干细胞培养方法及所用培养基对多功能干细胞进行培养，所得多功能干细胞的纯度高，易于获得大量多功能干细胞，克服了一直以来难以实现大批量培养多功能干细胞的难题。除此之外，采用本发明多功能干细胞培养方法及所用培养基对多功能干细胞进行培养，可以提高多功能干细胞的存活率，增强多功能干细胞的增殖能力，且在提高多功能干细胞的增殖能力的同时，不损害多功能干细胞的分化能力。

本发明的技术方案是：

一种多功能干细胞培养基，转铁蛋白0.5-0.8μg/mL，干细胞生长因子5-8μg/mL，表皮细胞生长因子1-3μg/mL，L-谷胱甘肽23-26μg/mL，细胞保护剂0.2-0.4μg/mL，生长诱导剂0.4-1μg/mL，天冬氨酸5-8μg/mL，柠檬酸铁32-40ng/mL，胰岛素10-15μg/mL，泛酸0.5-1.5μg/mL。

进一步地，所述的多功能干细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂的成分以终浓度计，包括：转铁蛋白0.6μg/mL，干细胞生长因子7μg/mL，表皮细胞生长因子2μg/mL，L-谷胱甘肽25μg/mL，细胞保护剂0.3μg/mL，生长诱导剂0.6μg/mL，天冬氨酸6μg/mL，柠檬酸铁34ng/mL，胰岛素13μg/mL，泛酸0.9μg/mL。

进一步地，所述细胞保护剂由D-海藻糖和羟乙基淀粉按质量比2-3:12-14组成。

进一步地，所述细胞保护剂由D-海藻糖和羟乙基淀粉按质量比2:13组成。