[发明专利]一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法

说明书

本发明提供一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法，包括以下步骤：（1）取烟草样品加入有机试剂，超声振荡后，将液体转移至新离心管中，加入净化剂，漩涡振荡、离心后，取有机层吹干，加入复溶液复溶，分层后，得到上层多菌灵待测液，下层甲基硫菌灵待测液；（2）将所述待测液与团聚剂、纳米金溶胶混合均匀后，通过便携式拉曼光谱仪检测，并分析测得的表面增强拉曼光谱图，获得多菌灵和甲基硫菌灵的检测结果。

技术领域

本发明涉及农药多菌灵、甲基硫菌灵的检测方法，具体是指利用表面增强拉曼光谱检测烟草中残留的多菌灵、甲基硫菌灵，属于农药残留分析检测领域。

背景技术

多菌灵和甲基硫菌灵均属于苯并咪唑类，是具有高效、广谱、低毒特点的一类杀菌剂，其通过干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成影响细胞分裂起到杀菌作用，广泛应用于农业生产中植物真菌病害的防治。甲基硫菌灵为在烟草上登记使用的农药，在植物体内可代谢为多菌灵。研究发现，甲基硫菌灵具有基因毒性和生殖毒性，其降解或代谢产物多菌灵残效期长，具有蓄积毒性。鉴于多菌灵和甲基硫菌灵的广泛施用及剂量依赖的潜在风险，发展多菌灵和甲基硫菌灵残留的快速检测具有重要意义。

目前，多菌灵和甲基硫菌灵残留的检测方法主要为液相色谱及其与质谱联用技术、免疫分析法等。如发明专利200610097540.1和发明专利201710608203.2分别公开了蔬菜和铁皮石斛中多菌灵和甲基硫菌灵残留的液相色谱检测方法。专利201410486081.0公开了一种液质联用仪同时检测柑橘中多菌灵、甲基硫菌灵等农药残留的方法。这类方法具有检测灵敏度高、特异性强等优势，但往往需要复杂的提取、净化等前处理过程，周期长、成本高，且需要昂贵的大型仪器，不适合批量样品的现场快速检测。专利201710250425.1公开了一种多菌灵和甲基硫菌灵二合一检测酶联免疫试剂盒，其相对于传统仪器分析技术具有快速简便等优势，但是在获得高效价和高特异性的抗体，以及提高方法检测灵敏度和检测限方面，仍待进一步研究和提高。而且，多菌灵与甲基硫菌灵结构相似，目前的快速检测方法仍未能很好地解决它们之间相互干扰的问题。因此，寻求特异性强、成本低、操作简便、检测速度快的多菌灵和甲基硫菌灵检测方法具有重要的现实意义。

表面增强拉曼光谱技术(SERS)是一种非常有效的探测分子间相互作用、表征表面分子吸附行为和分子结构的工具，具有检测灵敏度高、样品前处理简单、分析速度快、仪器体积小巧便于携带、检测成本低等优势，在环境污染物、食用添加剂、农药残留等的快速检测方面受到越来越多的关注。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于表面增强拉曼光谱的，同时、快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供一种同时快速检测烟草中多菌灵和甲基硫菌灵残留的方法，包括以下步骤：

(1)取烟草样品加入有机试剂，超声振荡后，将液体转移至新离心管中，加入净化剂，漩涡振荡、离心后，取有机层吹干，加入复溶液复溶，分层后，得到上层多菌灵待测液，下层甲基硫菌灵待测液；

其中，为使多菌灵和甲基硫菌灵充分溶出，所述有机溶剂为乙腈和甲苯的混合溶剂；所述复溶液为环己烷与纯水混合溶剂，

为了除去烟草中色素、多酚等的干扰，所述净化剂为N-丙基乙二胺键合固相吸附剂(PSA)和无水硫酸镁；

(2)将所述待测液与团聚剂、纳米金溶胶混合均匀后，通过便携式拉曼光谱仪检测，并分析测得的表面增强拉曼光谱图，获得多菌灵和甲基硫菌灵的检测结果。

在一些实施方式中，步骤(1)中，为使多菌灵和甲基硫菌灵充分溶出，将烟草样品按照1：5～20的比例与有机试剂混合后，超声振荡1～5min。所述有机溶剂为体积比5：0.5～2.5的乙腈和甲苯的混合溶剂。