[发明专利]利用CRISPR/Cas9和PiggyBac实现双等位精确基因组编辑的系统

权利要求书

1.一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：该编辑系统包括第一供体载体、第二供体载体以及用于打靶基因组的CRISPR/Cas9表达载体；所述第一供体载体和第二供体载体包括与所述基因组中由回文序列连接的上游片段和下游片段同源的序列以及连接在该上游片段和下游片段的同源序列之间的可通过同源重组修复替换所述回文序列的转座子序列；第一供体载体和第二供体载体的转座子序列包括用于对含有对应转座子序列的基因组进行富集的筛选基因表达盒以及位于对应筛选基因表达盒两端的可被转座酶识别的反向末端重复序列，反向末端重复序列与位于对应端的所述上游片段或下游片段的同源序列相连。

2.根据权利要求1所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述CRISPR/Cas9表达载体包括目的基因靶位点sgRNA序列表达盒和Cas9核酸酶基因表达盒。

3.根据权利要求1所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述CRISPR/Cas9表达载体的打靶位点位于回文序列TTAA附近，打靶位点与回文序列TTAA的距离为≤50bp。

4.根据权利要求1所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述筛选基因表达盒包括正向药物筛选基因序列；第一供体载体和第二供体载体的正向药物筛选基因不同。

5.根据权利要求4所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述筛选基因表达盒还包括荧光蛋白基因序列；第一供体载体和第二供体载体的荧光蛋白基因不同。

6.根据权利要求4或5所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述筛选基因表达盒还包括负向药物筛选基因序列。

7.根据权利要求6所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述筛选基因表达盒中，正向药物筛选基因、荧光蛋白基因和负向药物筛选基因为串联表达。

8.根据权利要求1所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述反向末端重复序列采用PiggyBac转座子系统中的特征序列5'ITR和3'ITR。

9.根据权利要求1所述一种双等位基因组编辑系统，其特征在于：所述编辑系统还包括转座酶表达载体。