[发明专利]一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法

权利要求书

1.一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、冲洗浸泡

优选干细胞分化产物，将其置于无菌托盘上，使用PBS反复缓慢冲洗，然后置于无菌生理盐水中浸泡；

S2、水浴振荡

将上述处理好的干细胞分化产物取出置于培养基中，培养基中加入CAS和EDTA，然后水浴振荡；

S3、一次离心

待水浴振荡后，将干细胞分化产物置于离心机内，进行离心分离；

S4、一次提取

待一次离心结束后，将上层清液提取出；

S5、抑制分裂

将一次提取后所剩的下层大颗粒物转移至试管中，然后向试管中加入混合液，使用无菌玻璃棒缓慢搅拌，然后静置；

S6、二次离心

将上述下层大颗粒物再次倒入离心机内，进行离心分离；

S7、二次提取

待二次离心后，将上层清液取出，然后将最下层大颗粒物收集；

S8、纯度检测

对一次提取中的上清液和二次提取中的大颗粒物进行纯度检测。

2.根据权利要求1所述的一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，其特征在于，所述S1中干细胞分化产物浸泡在无菌生理盐水的时间为25—40min。

3.根据权利要求1所述的一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，其特征在于，所述S2中干细胞分化产物35—40℃在环境下水浴振荡25—40min。

4.根据权利要求1所述的一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，其特征在于，所述S3中先控制离心机转速变化为30—60rpm/s，使得转速稳定在500—600rpm，保持转速不变离心15—25min；然后再次控制转速变化为30—50rpm/s，使得转速为700—840rpm，保持转速不变离心20—30min。

5.根据权利要求1所述的一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，其特征在于，所述S5中混合液为环磷酰胺、白消安、甲氨蝶呤和虾青素中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，其特征在于，所述S6中先控制离心机转速变化为30—50rpm/s，使得转速稳定在300—450rpm，保持转速不变离心10—15min；然后再次控制转速变化为50—60rpm/s，使得转速为600—800rpm，保持转速不变离心20—30min。