[发明专利]一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法

说明书

本发明公开一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，包括冲洗浸泡、水浴振荡、一次离心、一次提取、抑制分裂、二次离心、二次提取、纯度检测。本发明与传统方法相比，效率更快，清除效果更好，而且能够有效限制多能干细胞的分裂和分化，提高了分离后细胞的纯度；采用差速离心法分离细胞，并根据干细胞的贴壁性将其分离，提高了细胞分离的准确性。解决了现有技术中干细胞分化体系中残留的多能干细胞无法有效清除，进而影响细胞纯度的问题。

技术领域

本发明属于干细胞领域，具体涉及一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法。

背景技术

干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞、能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞。干细胞研究受到科学家和世人的广泛关注有其必然性，干细胞在生命科学的细胞修复、发育生物学、药物学等领域有着极为广阔的应用前景。其中多能干细胞是当前干细胞研究的热点和焦点。

多能干细胞，具有分化出多种细胞组织的潜能，但失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。可以分化成体内所有的细胞，进而形成身体的所有组织和器官。因此，多能干细胞的研究不仅具有重要的理论意义，而且在器官再生、修复和疾病治疗方面极具应用价值。

在实际细胞培养过程中，干细胞分化结束后往往会残留部分多能干细胞，为了保证纯度需要将为分化的多能干细胞清除，现有的清除方式繁琐复杂，而且清除效果不明显，因此设计一种简便且有效地清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法是符合实际需要的。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，解决了现有技术中干细胞分化体系中残留的多能干细胞无法有效清除，进而影响细胞纯度的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法，包括如下步骤：

S1、冲洗浸泡

优选干细胞分化产物，将其置于无菌托盘上，使用PBS反复缓慢冲洗，然后置于无菌生理盐水中浸泡；

S2、水浴振荡

将上述处理好的干细胞分化产物取出置于培养基中，培养基中加入CAS和EDTA，然后水浴振荡；

S3、一次离心

待水浴振荡后，将干细胞分化产物置于离心机内，进行离心分离；

S4、一次提取

待一次离心结束后，将上层清液提取出；

S5、抑制分裂

将一次提取后所剩的下层大颗粒物转移至试管中，然后向试管中加入混合液，使用无菌玻璃棒缓慢搅拌，然后静置；

S6、二次离心

将上述下层大颗粒物再次倒入离心机内，进行离心分离；

S7、二次提取

待二次离心后，将上层清液取出，然后将最下层大颗粒物收集；

S8、纯度检测

对一次提取中的上清液和二次提取中的大颗粒物进行纯度检测。

进一步的，所述S1中干细胞分化产物浸泡在无菌生理盐水的时间为25—40min。

进一步的，所述S2中干细胞分化产物35—40℃在环境下水浴振荡25—40min。