[发明专利]一种发酵法与酶法联合制备贝类高F值寡肽的方法

说明书

本发明公开了一种发酵法与酶法联合制备贝类高F值寡肽的方法，包括内切酶酶解与外切酶酶解，在外切酶酶解的过程中使用瑞士乳杆菌。本发明将瑞士乳杆菌应用于贝类高F值寡肽的生产，将发酵产酶和酶解合成一步，有效脱除了芳香族氨基酸，不需单独使用吸附剂进行脱芳；同时有效脱除了产品的苦味。本发明简化了高F值寡肽的生产工序，大幅度降低了生产成本。

技术领域

本发明属于活性肽制备领域，具体涉及一种发酵法与酶法联合制备贝类高F值寡肽的方法。

背景技术

高F值寡肽是由2-9个氨基酸残基组成的寡肽混合物，其中支链氨基酸（缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸）与芳香族氨基酸（苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸）的摩尔比值一般大于20，此比值比人体模式中的比值高，该肽可以应用于改善肝病患者的营养状况和肝损伤、辅助肝性脑病及苯丙酮尿症的治疗等多个方面，且具有抗疲劳、抗衰老、解酒等生理功能，可用以开发肝病全营养配方食品、功能性食品、药物等，市场前景巨大。

目前，高F值寡肽的生产主要通过内切酶和外切酶两步酶解法来实现芳香族氨基酸的游离，再通过活性炭、超滤等方法去除芳香族氨基酸，这种生产方法要求酶具有与底物的特异性识别位点，酶的使用量大，不能重复利用，易引起产品出现苦味，需要进行脱芳、脱苦等分离纯化步骤，工序复杂，从而导致生产成本较高。为了降低酶的使用量，可以利用固定化酶进行酶解，但其他的问题依然存在。

发明内容

本发明针对上述现有技术存在的不足，解决酶解体系中酶解方法的局限性、简化工序、降低成本等问题，提供一种发酵法与酶法联合制备贝类高F值寡肽的方法。

本发明利用瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）生长过程中产生的强大酶系，通过发酵法与酶法联合在发酵体系中一次性获得无苦味的贝类高F值寡肽，开发了一种新型的高F值寡肽生产方法。该方法将产酶和酶解合成一步，省去了分离纯化过程，大幅度降低了生产成本。

具体技术方案如下：

一种发酵法与酶法联合制备贝类高F值寡肽的方法，包括内切酶酶解与外切酶酶解，在外切酶酶解的过程中使用瑞士乳杆菌。

本发明包括如下步骤：

（1）将去壳贝肉破碎，并与水混合，得料浆；

（2）将内切酶加入步骤（1）获得的料浆中，进行酶解；

（3）调节步骤（2）获得的体系的pH值为6-8，加入外切酶、培养基和瑞士乳杆菌，在35-45℃条件下培养20-30 h；灭菌灭酶，离心分离，得发酵液；

（4）对发酵液进行超滤去除大分子蛋白。

本发明在外切酶酶解的同时使用瑞士乳杆菌进行发酵，利用生长过程中产生的强大酶系，发酵法与酶法联合在发酵体系中一次性获得无苦味的贝类高F值寡肽，其机理应为瑞士乳杆菌在生长代谢过程中产生的酶系能起到内外双切芳香族氨基酸的作用，在外源蛋白酶的作用下，共同将芳香族氨基酸游离出来，又在生长过程中将芳香族氨基酸和苦味氨基酸作为底物进行消化吸收利用，从而实现芳香族氨基酸和苦味氨基酸的脱除。本发明方法得到的寡肽其F值在22以上，不需使用活性炭等吸附剂或纳滤方法进行芳香族氨基酸的脱除。

进一步，步骤（2）中，所述的内切酶为胃蛋白酶，其用量为以去壳贝肉计500-800U/g。

再进一步，步骤（2）的酶解条件为调节pH值为2-3.5，在35-45℃条件下酶解6-9 h。

进一步，步骤（3）中所述的外切酶为风味蛋白酶，其用量为以去壳贝肉计300-500U/g。