[发明专利]辅助诊断结直肠癌的组合物、试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种辅助诊断结直肠癌的组合物，所述组合物包括：

检测Septin9基因甲基化的引物：

正向引物SEQ ID NO:1：

5’-GCGGGAACCTGATCCGCCCGGGAGGCGGGG-3’；

反向引物SEQ ID NO:2：

5’-CCTGGCTCAGCTGAATGAATGGGGGAGG-3’；

检测Septin9基因甲基化的荧光探针：

荧光探针SEQ ID NO:3：5’ -AGGGGCCGGCGCCCGCCTTC-3’；

检测NDRG4基因甲基化的引物：

正向引物SEQ ID NO:4：5’ -GGATATTTTTGTTAGGGGATGTTTT-3’；

反向引物SEQ ID NO:5：5’-CTCCCAAAAAAAACCTTAAACCTAC-3’；

检测NDRG4基因甲基化的荧光探针：

荧光探针SEQ ID NO:6：5’ -TAAGGATATTTTCGGG-3’；

检测SDC2基因甲基化的引物：

正向引物SEQ ID NO:7：5’-GGGAGTGTAGAAATTAATAAGTGAGAG-3’；

反向引物SEQ ID NO:8：5’-ACCAAACCCAAAATAAACAAAATC-3’；以及

检测SDC2基因甲基化的荧光探针：

荧光探针SEQ ID NO:9：5’-CCCCGAGCCCGAGTCCCCGAGC-3’。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述荧光探针的荧光报告基团互不干扰。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述组合物进一步包括阻断探针。

4. 根据权利要求3所述的组合物，其中，所述阻断探针SEQ ID NO:10为5’-TGGTGCCTGCCTTCCTCCCC-3’。

5.根据权利要求1~4中任一项所述的组合物，其中，所述组合物进一步包括用于监控的内标上游引物、内标下游引物和内标探针。

6. 根据权利要求5所述的组合物，其中，所述组合物包括如SEQ ID NO:11所示的内标上游引物、如SEQ ID NO:12所示的内标下游引物，和如SEQ ID NO:13所示的内标探针。

7. 根据权利要求6所述的组合物，其中，如SEQ ID NO:3所示的Septin9基因荧光探针的荧光报告基团为FAM；如SEQ ID NO:6所示的NDRG4基因荧光探针的荧光报告基团为VIC；如SEQ ID NO:9所示的SDC2基因荧光探针的荧光报告基团为ROX；如SEQ ID NO:13所示的内标荧光探针的荧光报告基团为CY5。

8.权利要求1~7中任一项所述的组合物在制备辅助诊断结直肠癌的试剂盒中的用途。

9.一种辅助诊断结直肠癌的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1~7中任一项所述的组合物。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括其余PCR所需试剂。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，所述其余PCR所需试剂为核酸释放试剂、dNTP、DNA聚合酶、UDG酶、PCR缓冲液以及Mg²⁺中的至少一种。