[发明专利]脐血血小板线粒体在制备治疗自身免疫疾病药物中的应用有效
申请号: | 202010894223.2 | 申请日: | 2020-08-31 |
公开(公告)号: | CN112156111B | 公开(公告)日: | 2022-10-18 |
发明(设计)人: | 赵莲 | 申请(专利权)人: | 中南大学湘雅三医院 |
主分类号: | A61K35/19 | 分类号: | A61K35/19;A61P37/02;C12N5/078 |
代理公司: | 长沙智嵘专利代理事务所(普通合伙) 43211 | 代理人: | 李婷婷 |
地址: | 410013 湖南*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 血小板 线粒体 制备 治疗 自身免疫 疾病 药物 中的 应用 | ||
1.脐血血小板线粒体在制备治疗免疫性疾病药物中的应用,其特征在于,
脐血血小板线粒体的使用浓度:10μg/mL~2000μg/mL;
所述免疫性疾病为免疫缺陷的C.B.17 scid /scid小鼠的注入CD4+CD45RB+ T细胞导致的炎性肠病;
所述脐血血小板线粒体的分离方法,包括以下步骤:
S1、取20mL脐血缓慢加至淋巴细胞分离液中,其中,脐血体积∶淋巴细胞分离液体积=1∶1,离心,离心条件:20℃,400g~1610g,25min,开始加速度:0,结束时减速度:0,离心结束后,脐血分层,吸取外周血单个核细胞层上面的上清液;
S2、将步骤S1收集的上清液,离心,离心条件:20℃,300g,10min,开始加速度:+8,结束时减速度:-9,去除沉淀,收集上清液;
S3、将步骤S2收集的上清液转至新的50mL离心管中,加入与上清液等体积的生理盐水,混匀离心,离心条件:20℃,2000g~4000g,5min~20min,开始加速度:+8,结束时减速度:-9,去除上清液,收集沉淀的粗品血小板;
S4、采用生理盐水重悬粗品血小板,混匀离心,再重复重悬、离心两次,去除上清液,获得脐血血小板;
S5、采用线粒体抽提试剂盒对血小板的线粒体进行抽提,获得所述脐血血小板线粒体。
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