[发明专利]大豆E2/GIGANTEA同源基因定量PCR引物及其应用

说明书

本发明公开了一种大豆E2/GIGANTEA同源基因定量PCR引物及其应用。本发明提供了一套用于检测大豆E2/GIGANTEA同源基因表达量的特异性定量PCR引物，为序列表中序列1‑6所示的六条单链DNA。本发明通过采用实时定量PCR的方法，明确GIGANTEA(GI)及其同源基因表达特性，由于该基因不仅在大豆生育期中具有重要作用，而且在生物节律性运动/生物钟中具有重要作用，因此检测该基因的表达，在大豆生物学研究及应用中具有重要作用。本发明对于了解掌握大豆生长习性有重要意义。

技术领域

本发明涉及大豆分子遗传育种领域，具体涉及一种大豆E2/GIGANTEA同源基因定量PCR引物及其应用。

背景技术

实时定量PCR技术可以方便快捷的评价目标基因表达水平，是分子生物学和分子遗传育种领域的广泛使用的重要分析工具。然而，它对目标基因引物设计的专一性特异性的要求高，这成为目标基因表达水平精准分析的限制性因素。尤其是在基因组同源基因拷贝数较多的情况下，如何设计可正确有效区分各个同源基因的特异性引物至关重要。

大豆是典型的短日照作物，也是植物光周期反应研究的模式材料，更是世界上最为重要的油料作物和高蛋白粮食作物。在我国，大豆是四大粮食作物之一，对保证国家粮食安全、改善城乡人民生活和增加农民收入有十分重要的作用。

外部环境时刻在变化，最为直观显著的是昼夜更替与四季变化，及与之密切相关的温度波动。生物适应这种外界的波动，发展了一套追随时间的内在机制，即生物节律钟(circadian clock)。生物节律钟通常包括三个部分：信号输入途径、节律振荡子和信号输出途径。信号输入途径感知外部环境信号的周期性波动如光照与温度的昼夜变化，传递给节律振荡子，调节生物节律钟的节律，输出节律信号到信号输出途径，调节目标基因、蛋白和代谢产物，从而使生物更好地适应外界环境。由此，与昼夜更替周期相一致，生物节律钟大体保持24h的周期。生物节律钟往往由多个基因/蛋白构成，形成多个互锁的转录翻译反馈环路。研究生物节律钟对于了解掌握大豆生长习性至关重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种大豆E2/GIGANTEA同源基因定量PCR引物及其应用。

第一方面，本发明保护引物组合，该引物组合包括引物对Ⅰ、引物对Ⅱ和引物对Ⅲ；

所述引物对Ⅰ由引物Glyma.10G221500-F和引物Glyma.10G221500-R组成；

所述引物Glyma.10G221500-F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物Glyma.10G221500-R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物对Ⅱ由引物Glyma.16G163200-F和引物Glyma.16G163200-R组成；

所述引物Glyma.16G163200-F为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物Glyma.16G163200-R为如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；