[发明专利]化学发光传感器及检测细菌或人类甲基转移酶中的应用

权利要求书

1.一种化学发光传感器，其特征是，包括哑铃探针、S-腺苷甲硫氨酸、引物、DNA聚合酶、血红素、鲁米诺、H₂O₂；

所述哑铃探针为闭合大环状DNA，哑铃探针的结构是中间为茎、两端均为小环的哑铃状结构，茎结构为双链DNA，茎结构含有两个半甲基化的识别位点，小环结构富含C序列，当半甲基化的识别位点在DNA甲基转移酶和S-腺苷甲硫氨酸的作用下转化为全甲基化位点时，哑铃探针在引物和DNA聚合酶能够进行滚环DNA扩增，在小环结构富含C序列作用下滚环DNA扩增能够产生富含G序列的产物，富含G序列的产物能够折叠成G-四链体二级结构，G-四链体二级结构能够与血红素形成血红素-G-四链体DNA酶，血红素-G-四链体DNA酶能够催化H₂O₂介导鲁米诺氧化产生增强的化学发光信号。

2.如权利要求1所述的化学发光传感器，其特征是，包括BssHII核酸内切酶；

或，包括核酸外切酶I和核酸外切酶III。

3.如权利要求1所述的化学发光传感器，其特征是，半甲基化的识别位点为5'-GmCGCGC-3'。

4.如权利要求1所述的化学发光传感器，其特征是，哑铃探针由两个发夹探针的突出端互补杂交后，经过DNA连接酶连接形成。

5.一种权利要求1～4任一所述的化学发光传感器在检测细菌或人类甲基转移酶中的应用。

6.一种细菌或人类甲基转移酶的检测方法，其特征是，提供权利要求1～4任一所述的化学发光传感器；

将哑铃探针和S-腺苷甲硫氨酸与待测溶液进行混合进行甲基化反应，先向甲基化反应后的体系中添加BssHII核酸内切酶进行孵育处理，再添加核酸外切酶I和核酸外切酶III进行孵育处理；然后添加引物、DNA聚合酶进行滚环DNA扩增反应，向滚环DNA扩增反应后的体系中添加鲁米诺、血红素进行孵育，再添加H₂O₂进行化学发光检测；所述待测溶液含有M.SssIMTase或Dnmt1。

7.如权利要求6所述的细菌或人类甲基转移酶的检测方法，其特征是，甲基化反应的条件为：先在35～40℃下孵育，然后加热至60～70℃灭活；

或，添加BssHII核酸内切酶进行孵育处理的条件为：先在35～40℃下孵育，然后加热至60～70℃灭活。

8.如权利要求6所述的细菌或人类甲基转移酶的检测方法，其特征是，添加核酸外切酶I和核酸外切酶III进行孵育处理的条件为：先在35～40℃下孵育，然后加热至75～85℃灭活；

或，滚环DNA扩增反应的条件为：先在50～60℃下孵育，然后加热至75～85℃灭活。

9.一种权利要求1～4任一所述的化学发光传感器在筛选M.SssIMTase抑制剂或Dnmt1抑制剂中的应用。

10.一种M.SssIMTase或Dnmt1的检测试剂盒，其特征是，包括权利要求1～4任一所述的化学发光传感器、缓冲液。