[发明专利]化学发光传感器及检测细菌或人类甲基转移酶中的应用

说明书

本发明公开了化学发光传感器及检测细菌或人类甲基转移酶中的应用，化学发光传感器包括哑铃探针、S‑腺苷甲硫氨酸、引物、DNA聚合酶、血红素、鲁米诺、H₂O₂；所述哑铃探针的茎结构含有两个半甲基化的识别位点，小环结构富含C序列，当半甲基化的识别位点在DNA甲基转移酶和S‑腺苷甲硫氨酸的作用下转化为全甲基化位点时，哑铃探针在引物和DNA聚合酶能够进行滚环DNA扩增，在小环结构富含C序列作用下滚环DNA扩增能够产生富含G序列的产物，富含G序列的产物能够经过折叠、与血红素配合形成血红素‑G‑四链体DNA酶，血红素‑G‑四链体DNA酶能够催化H₂O₂介导鲁米诺氧化产生增强的化学发光信号。

技术领域

本发明属于生物分析技术领域，涉及化学发光传感器及检测细菌或人类甲基转移酶中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

DNA甲基化是人类基因组中高度表征的表观遗传修饰。通过从S-腺苷甲硫氨酸转移甲基(SAM)到特定DNA序列中的腺嘌呤/胞嘧啶残基，DNA甲基转移酶建立和维持某些基因组甲基化模式。最近的研究表明，DNA甲基转移酶活性的改变会导致异常的DNA甲基化模式。

据发明人了解，迄今为止，已发展出多种方法来检测DNA甲基转移酶的活性。传统方法主要是放射性标记法、免疫印迹法、高效液相色谱法(HPLC)和凝胶电泳。然而，他们涉及不安全的同位素标记、漫长的测定程序、昂贵的抗体和仪器，极大的限制了他们的实际应用。最近，一些新方法，包括比色法、荧光法和电化学法，用于定量检测DNA甲基转移酶，但是，经发明人研究发现，这些方法仍然不够灵敏，不足以检测极低的丰富的DNA甲基转移酶。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供化学发光传感器及检测细菌或人类甲基转移酶中的应用，能够更简单的对DNA甲基转移酶进行高灵敏度检测。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

一方面，一种化学发光传感器，包括哑铃探针、S-腺苷甲硫氨酸、引物、DNA聚合酶、血红素、鲁米诺、H₂O₂；

所述哑铃探针为闭合大环状DNA，哑铃探针的结构是中间为茎、两端均为小环的哑铃状结构，茎结构为双链DNA，茎结构含有两个半甲基化的识别位点，小环结构富含C序列，当半甲基化的识别位点在DNA甲基转移酶和S-腺苷甲硫氨酸的作用下转化为全甲基化位点时，哑铃探针在引物和DNA聚合酶能够进行滚环DNA扩增(RCA)，在小环结构富含C序列作用下滚环DNA扩增能够产生富含G序列的产物，富含G序列的产物能够折叠成G-四链体二级结构，G-四链体二级结构能够与血红素形成血红素-G-四链体DNA酶，血红素-G-四链体DNA酶能够催化H₂O₂介导鲁米诺氧化产生增强的化学发光信号。

本发明设计了一种结构可切换的哑铃型探针，该探针将靶标识别，BssHII核酸内切酶识别，RCA扩增和信号转导整合到一个探针中，避免了使用多个探针，并大大减少了由于多个探针意外碰撞而导致的假阳性。本发明的传感器可以简单地执行而无需任何标记和分离程序。该传感器能够灵敏地检测M.SssI MTase活性，检测线达到了1.004×10^-7U/μL，甚至可以灵敏地检测Dnmt1活性。

另一方面，一种上述化学发光传感器在检测细菌或人类甲基转移酶中的应用。

第三方面，一种细菌或人类甲基转移酶的检测方法，提供上述化学发光传感器；