[发明专利]烟草黑胫病预警基因Ntab0278480及其应用

权利要求书

1.烟草黑胫病预警基因Ntab0278480，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID No.2所示，具体如下：

GTTTAGAACTCGGCAGCGTTTCGATACGTTCGTACGCTTTCGATATCGTCAGAGACGAAATAAGAAATCGGCTCATTCCACTTTTAGAAAGTAACCAGAATGGCACCGTTTTGGATTTGCAAGATGTTTTTAGGCGATTCTCGTTTGATAGTATATGTAAATTCTCTTTTGGAATGGATCCGGGTTGCTTG。

2.权利要求1所述烟草黑胫病预警基因Ntab0278480在烟草黑胫病防治中应用，其特征在于，作为预警基因用于指示黑胫病的感染情况。

3.针对权利要求1所述烟草黑胫病预警基因Ntab0278480的检测用PCR引物，其特征在于，具体引物序列为：

Ntab0278480-F：5’-GTTTAGAACTCGGCAGCGTT-3’，

Ntab0278480-R：5’-CAAGCAACCCGGATCCATTC-3’。

4.利用权利要求3所述检测用PCR引物所制备的qRT-PCR检测试剂盒。

5.如权利要求4所述qRT-PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括检测参考基因L25用引物，具体引物序列为：

L25-F：5’-CCCCTCACCACAGAGTCTGC-3’，

L25-R：5’-AAGGGTGTTGTTGTCCTCAATCTT-3’。

6.利用权利要求3所述检测用PCR引物的烟草黑胫病检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（一）提取待检烟叶样品总RNA，并反转录cDNA；

（二）以正常生长未感染烟株烟叶样品作为对照，以L25为参考基因，利用Ntab0278480-F/R引物对进行qRT-PCR检测，计算Ntab0278480的相对表达量；

所述参考基因L25，为利用如下引物序列PCR扩增所得基因：

L25-F：5’-CCCCTCACCACAGAGTCTGC-3’，

L25-R：5’-AAGGGTGTTGTTGTCCTCAATCTT-3’；

（三）依据步骤（三）中表达量情况判定待检样品黑胫病感染情况，具体而言：

相较于对照组，如果Ntab0278480的相对表达量变化不具有统计学意义，则表明待检样品未感染黑胫病；

如果Ntab0278480的相对表达量升高低于1.5倍，则需停留不少于6h后重新检测判定；

如果Ntab0278480的相对表达量升高不低于1.5倍，则按照如下情况判定黑胫病发病阶段；

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