[发明专利]特征肽段、检测方法及试剂盒

权利要求书

1.特征肽段，其特征在于，至少包括氨基酸序列分别为QGLLPVLESFK、LSPLGEEMR、LGPLVEQGR、AATVGSLAGQPLQER、LQAEAFQAR、VTTVASHTSDSDVPSGVTEVVVK以及TLLSNLEEAK的肽段。

2.检测方法，其特征在于，包括在同时检测载脂蛋白A、载脂蛋白E以及载脂蛋白J时，将与权利要求1中所述特征肽段对应的同位素标记肽段作为内标物。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，包括：

配制同位素标记肽段内标液；

利用替代基质配制所述特征肽段的校正标样；

取待测样品，依次用二硫苏糖醇溶液、碘乙酰胺溶液、胰蛋白酶进行处理，加入同位素标记肽段内标液，上柱，洗脱，氮气吹干或冷冻干噪，复溶，得待测样品溶液；

取所述校正标样，加入同位素标记肽段内标液，用液相色谱质谱联用仪器进行分析，记录所述特征肽段的峰面积以及对应的同位素标记肽段的峰面积，建立以峰面积之比和浓度为坐标的标准曲线；

将所述待测样品溶液用液相色谱质谱联用仪器进行分析，记录所述特征肽段的峰面积以及对应的同位素标记肽段的峰面积，将峰面积之比代入标准曲线，计算载脂蛋白A、载脂蛋白E、载脂蛋白J的浓度。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，还包括：

利用替代基质配制所述特征肽段的质控样品，向质控样品中加入同位素标记肽段内标液，用液相色谱质谱联用仪器进行分析，记录所述特征肽段的峰面积以及对应的同位素标记肽段的峰面积，将峰面积之比代入标准曲线，计算质控样品回收率值。

5.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述替代基质的制备方法包括：

取牛清白蛋白，依次用二硫苏糖醇溶液、碘乙酰胺溶液和胰蛋白酶进行处理，上柱，洗脱，氮气吹干或冷冻干噪，复溶，得替代基质。

6.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，液相色谱质谱联用仪器为LC-MS/MS；

质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源，正离子方式检测，扫描方式为多重反应监测。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，多重反应监测的参数包括：

其中，VTTVASHTSDSDVPSGVTEVVVK*、TLLSNLEEAK*、LGPLVEQGR*、AATVGSLAGQPLQER*、LQAEAFQAR*、QGLLPVLESFK*、LSPLGEEMR*分别表示特征肽段VTTVASHTSDSDVPSGVTEVVVK、TLLSNLEEAK、LGPLVEQGR、AATVGSLAGQPLQER、LQAEAFQAR、QGLLPVLESFK、LSPLGEEMR的对应的同位素标记肽段。

8.试剂盒，其特征在于，包括：

内标液，其由与权利要求1中所述特征肽段对应的同位素标记肽段配制得到；

校正标样，其由替代基质和所述特征肽段配制得到；

二硫苏糖醇溶液和碘乙酰胺溶液，用于处理待测样品。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括：

质控样品，其由替代基质和所述特征肽段配制得到，所述质控样品至少包括高、中、低三种不同浓度。

10.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括：

缓冲液1和缓冲液2，缓冲液1由碳酸氢铵、尿素和水配制而成，缓冲液2由碳酸氢铵和水配制而成。