[发明专利]特征肽段、检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了特征肽段，至少包括氨基酸序列分别为QGLLPVLESFK、LSPLGEEMR、LGPLVEQGR、AATVGSLAGQPLQER、LQAEAFQAR、VTTVASHTSDSDVPSGVTEVVVK以及TLLSNLEEAK的肽段。本发明还提供了检测方法和试剂盒。本发明利用特征肽段对应的同位素标记肽段作为内标物，实现同时、定量检测血浆或血清中载脂蛋白A、载脂蛋白E、载脂蛋白J的浓度。

技术领域

本发明涉及蛋白质检测技术领域。更具体地说，本发明涉及载脂蛋白A、载脂蛋白E、载脂蛋白J定量检测相关的特征肽段、检测方法及试剂盒。

背景技术

脂蛋白中蛋白部分称为载脂蛋白(Apolipoprotein,Apo)，载脂蛋白在脂蛋白代谢中具有重要生理功能。载脂蛋白的主要功能有：①维持脂蛋白的结构与脂类运输；②调控脂代谢有关酶的活性；③作为细胞表面脂蛋白受体的配体而参与脂蛋白的代谢。载脂蛋白一般分为载脂蛋白A、载脂蛋白B、载脂蛋白C、载脂蛋白D、载脂蛋白E和载脂蛋白J等，每种又分为若干亚型。载脂蛋白A(Apolipoprotein A，ApoA)是构成血浆高密度脂蛋白的重要组分，具有清除组织脂质和抗动脉粥样硬化的作用。载脂蛋白A-Ⅱ(ApoAⅡ)是载脂蛋白A家族中最重要的组分之一。ApoAⅡ可以水解乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯，其血清浓度与发生冠心病的危险性呈负相关。载脂蛋白E(Apolipoprotein E，ApoE)是一种多态性蛋白，参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节许多生物学功能，与许多眼科疾病发病有关，对ApoE及其基因多态性的研究是目前医学研究的热点之一，探讨两者之间的内在联系，对眼病的预防、诊断及治疗具有重要的临床应用价值。ApoE主要存在于CM、VLDL、中密度脂蛋白(IDL)和部分高密度脂蛋白(HDL)中，Apo E的浓度与血浆甘油三酯含量呈正相关。载脂蛋白J(Apolipoprotein J，ApoJ)是HDL和VHDL相结合的糖蛋白，它是一种分子量约为70KD的二聚体蛋白质。广泛分布于人体各种组织，除了负责运输脂质外，还参与补体功能调节、精子成熟、膜再循环等生理过程以及与某些疾病的发病有关。

传统的大分子蛋白类化合物定量研究多采用等电聚焦电泳、双向凝胶电泳、免疫印迹等方法进行测定，对于含量较低的蛋白类化合物酶联免疫吸附方法(enzyme-linkedimmunosorbent assays，ELISA)和放射性免疫标记方法(radioimmunoassay,RIA)具有其独特优势。其中ELISA因其较高灵敏度和适合批量测定等优点，已成为最为常用的蛋白多肽类化合物生物样品分析方法。但传统的免疫方法存在开发周期长、成本高，存在蛋白交叉反应等缺陷。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种特征肽段、检测方法及试剂盒，利用特征肽段对应的同位素标记肽段作为内标物，实现同时、定量检测血浆或血清中载脂蛋白A、载脂蛋白E、载脂蛋白J的浓度。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，根据本发明的一个方面，本发明提供了特征肽段，至少包括氨基酸序列分别为QGLLPVLESFK、LSPLGEEMR、LGPLVEQGR、AATVGSLAGQPLQER、LQAEAFQAR、VTTVASHTSDSDVPSGVTEVVVK以及TLLSNLEEAK的肽段。

根据本发明的另一个方面，本发明提供了检测方法，包括在同时检测载脂蛋白A、载脂蛋白E以及载脂蛋白J时，将与权利要求1中所述特征肽段对应的同位素标记肽段作为内标物。

进一步地，所述的检测方法，包括：

配制同位素标记肽段内标液；

利用替代基质配制所述特征肽段的校正标样；

取待测样品，依次用二硫苏糖醇溶液、碘乙酰胺溶液、胰蛋白酶进行处理，加入同位素标记肽段内标液，上柱，洗脱，氮气吹干或冷冻干噪，复溶，得待测样品溶液；