[发明专利]一种细菌来源的α-L-鼠李糖苷酶在高效生产橙皮素-7-O-葡萄糖苷中的应用

权利要求书

1.一种细菌来源的α-L-鼠李糖苷酶FjRha在高效生产橙皮素-7-O-葡萄糖苷中的应用，所述生产橙皮素-7-O-葡萄糖苷是以橙皮苷为底物；所述α-L-鼠李糖苷酶FjRha来源于约氏黄杆菌（Flavobacterium johnsoniae）；所述α-L-鼠李糖苷酶FjRha的编码核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述α-L-鼠李糖苷酶FjRha专一性水解α-1,6鼠李糖苷键。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述α-L-鼠李糖苷酶FjRha按照以下方法获得：以约氏黄杆菌（Flavobacterium johnsoniae）基因组DNA为模板，设计引物P1和P2，PCR扩增获得α-L-鼠李糖苷酶FjRha的编码基因序列，将PCR扩增产物和表达载体pET28a分别用Nhe I和EcoR I双酶切，纯化、连接，获得重组表达载体；将重组表达载体转化入大肠杆菌，在LB培养基中培养至对数生长期，然后经IPTG诱导表达，收集菌体，破壁纯化后得α-L-鼠李糖苷酶FjRha。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述IPTG的终浓度为0.1-0.5 mM；诱导温度为16℃；诱导时间为10-30 h。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物的序列为：

P1：5’-AATTGCTAGCAATTGTTCCAGAGTTTGTTTT-3’,下划线表示Nhe I酶切位点，

P2：5’-GCCGGAATTCCTAAACCGCTTTTCCATTT-3’,下划线表示EcoR 酶切I位点。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，是以橙皮苷为底物，具体步骤如下：

以橙皮苷为反应底物，在α-L-鼠李糖苷酶FjRha1的生物催化作用下，于温度20-50 ̊C，pH6.0~10.0条件下反应5-25小时，得唯一产物橙皮素-7-O-葡萄糖苷。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述橙皮苷的浓度为0.5-5 g/L，所述α-L-鼠李糖苷酶FjRha的用量为1-10 U/ mL。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述温度为40℃，所述pH为7.0。