[发明专利]一种Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测引物及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测Sf弹状病毒的荧光定量PCR引物，所述引物的核苷酸序列如下所示：

RhF1：CCCCGGAAGAATATGCCCTC(SEQ ID NO.1)；

RhR1：GCCACTGCAGAGTACAGGTT(SEQ ID NO.2)。

2.一种用于检测Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的荧光定量PCR引物。

3.根据权利要求2所述的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：荧光定量PCR试剂、阳性质控品、阴性质控品和内参引物。

4.根据权利要求3所述的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述内参引物的核苷酸序列如下所示：

SF-GAPDH F1：GCCACCACCGCTACCCAGAAGACT(SEQ ID NO.15)；

SF-GAPDH R1：AACGGGAACACGGAAAGCCATACC(SEQ ID NO.16)。

5.根据权利要求3所述的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含有如SEQ ID NO.23所示核苷酸序列的重组质粒。

6.根据权利要求3所述的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为细胞培养液。

7.一种Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.从样品中提取RNA；

S2.将RNA反转录获得cDNA；

S3.以cDNA为模板，用权利要求1中所述荧光定量PCR引物进行荧光定量PCR检测；

S4.分析检测结果的Ct值判断样品中是否含有Sf弹状病毒。

8.根据权利要求7所述的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，步骤S3中所述荧光定量PCR检测的扩增程序为：95℃预变性2分钟；95℃5秒，60℃30秒，40个循环。

9.根据权利要求7所述的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，步骤S3中所述荧光定量PCR检测的溶解程序为：95℃15秒，60℃30秒，从60℃到95℃按照1％梯度升温，升至95℃30秒，25℃30秒。

10.根据权利要求7所述的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，步骤S4中判断标准为：

若样品的Ct值≥30，且阴性对照Ct值≥30，则判断样品中不含弹状病毒；

若样品的Ct值＜30，且阴性对照Ct值≥30，判断样品中含有弹状病毒。