[发明专利]一种Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测引物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测Sf弹状病毒的荧光定量PCR引物及试剂盒。所述荧光定量PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.2所示。本发明的荧光定量PCR引物可以特异性检测Sf弹状病毒，检测的灵敏度高，在8E*10‑10拷贝范围内都有极好的线性关系，高效检测Sf弹状病毒，提高了检测效率。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，更具体地，涉及一种Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测引物及试剂盒。

背景技术

昆虫细胞Sf9细胞是从草地贪夜蛾分离得到了一种细胞系，这种细胞系常用于生产重组蛋白，还用于疫苗的生产中，一直以来，研究机构及企业认为该细胞无弹状病毒污染。2014年，美国食品药物监督局FDA的研究人员发现，Sf9细胞系潜伏着一种之前并未发现过的Sf弹状病毒(Sf-rhabdovirus)。研究人员通过PCR和大规模平行测序实验发现这种病毒，同时通过电子显微镜观察到了这种弹状病毒样颗粒。

目前，需要去证明在那些用于生产生物制品的细胞系以及产品中存在Sf弹状病毒。检测该病毒的方法有常规的普通PCR、电镜观察等，检出灵敏度不高，标本制备繁琐，成本高。因此，急需一种可以快速准确检测昆虫细胞中Sf弹状病毒的方法。

发明内容

本发明第一个方面的目的，在于针对现有技术中缺乏快速检测昆虫细胞中Sf弹状病毒的方法，提供一种用于Sf弹状病毒的荧光定量PCR引物。

本发明第二个方面的目的，在于提供一种用于检测Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测试剂盒。

本发明第三个方面的目的，在于提供一种Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供一种用于Sf弹状病毒的荧光定量PCR引物，所述引物的核苷酸序列如下所示：

RhF1：CCCCGGAAGAATATGCCCTC(SEQ ID NO.1)；

RhR1：GCCACTGCAGAGTACAGGTT(SEQ ID NO.2)。

本发明的第二个方面，提供一种用于检测Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，包括本发明第一个方面所述的荧光定量PCR引物。

进一步地，根据本发明第二个方面所述的试剂盒，所述试剂盒中还包括：荧光定量PCR试剂、阳性对照、阴性对照和内参引物。

进一步地，根据本发明第二个方面所述的试剂盒，所述内参引物的核苷酸序列如下所示：

SF-GAPDH F1：GCCACCACCGCTACCCAGAAGACT(SEQ ID NO.15)；

SF-GAPDH R1：AACGGGAACACGGAAAGCCATACC(SEQ ID NO.16)。

进一步地，根据本发明第二个方面所述的试剂盒，所述阳性对照为含有如SEQ IDNO.23所示核苷酸序列的重组质粒。

进一步地，根据本发明第二个方面所述的试剂盒，所述阴性对照为细胞培养液。

本发明的第三个方面，提供一种Sf弹状病毒的荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：

S1.从样品中提取RNA；

S2.将RNA反转录获得cDNA；

S3.以cDNA为模板，用本发明第一个方面所述引物进行荧光定量PCR检测；

S4.分析检测结果的Ct值判断样本中是否含有弹状病毒。