[发明专利]一种制备类泛素探针的多肽荧光底物方法

权利要求书

1.一种多肽的合成方法，其特征在于，将粗肽的碳端氨基酸与Gly-AMC进行缩合反应，以便获得所述多肽，所述缩合反应是在缩合剂的活化下进行的，所述缩合剂包括选自HCTU、HOBT、PyAOP、PyBOP、HBTU、HATU和HOAT的至少之一。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缩合剂为HCTU、PyAOP或HATU和HOAT。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缩合剂为HATU和HOAT，所述HATU和HOAT的物质的量比为1:1；

任选地，所述缩合剂为PyBOP、PyAOP、HCTU、HATU和HOAT或HBTU和HOBT，所述缩合反应进一步在加有DIEA的条件下进行的；

任选地，所述缩合剂为HOBT，所述缩合反应进一步在加有DIC的条件下进行的。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述粗肽是通过Fmoc固相合成法合成的。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述粗肽具有RLRGG的氨基酸序列，所述粗肽是通过如下方式获得的：

以氯树脂作为固相载体，经缩合剂活化，将待合成粗肽按照氨基酸由C端向N端的顺序逐个偶联到氯树脂上，最后一个氨基酸用Cbz保护，经全保护切割后，获得所述粗肽。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将待合成粗肽按照氨基酸由C端向N端的顺序逐个偶联到氯树脂上是在温度为30～32℃下、HCTU活化下进行的；

任选地，利用含有20％哌啶的DMF溶液进行脱Fmoc反应。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，最后一个氨基酸用Cbz保护是通过将连接有RLRGG的氯树脂在DIEA、CbzCl和DMF的混合溶液中进行的，所述混合溶液中的DIEA、CbzCl和DMF的体积比为1:1:8。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述全保护切割是通过将连接有RLRGG的氯树脂在1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇和DCM的混合溶液中进行的，所述混合溶液中的1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇和DCM体积比为1:4。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将待合成粗肽按照氨基酸由C端向N端的顺序逐个偶联到氯树脂上包括：

(1)将用DMF溶解的Fmoc-Gly-OH与DIEA在30～32℃下在多肽合成管中进行第一接触，以便将Gly偶联到所述氯树脂上；

(2)将偶联有Gly的氯树脂与含有20％哌啶的DMF溶液进行接触，以便脱除Fmoc；

(3)将用DMF溶解的Fmoc-Arg-OH与DIEA在30～32℃下在多肽合成管中进行第二接触，所述第二接触是在HCTU活化下进行的，以便将Arg偶联到Gly的N端；

(4)将偶联有Arg-Gly的氯树脂与含有20％哌啶的DMF溶液进行接触，以便脱除Fmoc；

(5)将用DMF溶解的Fmoc-Leu-OH与DIEA在30～32℃下在多肽合成管中进行第三接触，所述第三接触是在HCTU活化下进行的，以便将Leu偶联到Arg的N端；

(6)将偶联有Leu-Arg-Gly的氯树脂与含有20％哌啶的DMF溶液进行接触，以便脱除Fmoc；

(5)将用DMF溶解的Fmoc-Arg-OH与DIEA在30～32℃下在多肽合成管中进行第四接触，所述第四接触是在HCTU活化下进行的，以便将Arg偶联到Leu的N端；

(6)将偶联有Arg-Leu-Arg-Gly的氯树脂与含有20％哌啶的DMF溶液进行接触，以便脱除Fmoc。