[发明专利]检测凝血酶-抗凝血酶复合物的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及应用

说明书

本发明涉及一种生物检测试剂盒，特别涉及一种检测凝血酶‑抗凝血酶复合物（TAT）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及应用，属于免疫检测分析和纳米生物技术领域。一种检测凝血酶‑抗凝血酶复合物的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，该试剂盒包括集成在试剂条上的反应缓冲液、清洗液、增强液、包被TAT抗体的磁微粒溶液、铕标记的羊抗人IgG抗体溶液，TAT的冻干校准品。本发明所述试剂盒可以提供一种接近均相的反应体系，检测TAT的含量，缩短检测时间，提高了效率，为临床使用提供便利。

技术领域

本发明涉及一种生物检测试剂盒，特别涉及一种检测凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及应用，属于免疫检测分析和纳米生物技术领域。

背景技术

静脉血栓形成的关键环节是凝血酶生成，凝血酶作用于纤维蛋白原转变成纤维蛋白而形成血栓。由于产生的凝血酶在血液中半衰期极短，只有几秒钟，很快被抗凝物质中和掉，故直接测定凝血酶非常困难，取而代之的是检测凝血酶和其抑制因子抗凝血酶(AT)1:1结合的凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)。TAT的产生直接证实了凝血系统的活化。血栓调节蛋白（TM）表达于血管内皮细胞表面，可以辅助凝血酶激活蛋白C系统产生抗凝效果，TM代表内皮细胞活化。当凝血活化，纤维蛋白形成后，纤维蛋白激活t-PA，活化的t-PA进一步活化纤溶酶原转化为纤溶酶，后者降解纤维蛋白形成D-二聚体和FDP。活化的t-PA被PAI-I 1:1抑制，形成组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1复合物（t-PAIC），而活化的纤溶酶被α2-抗纤溶酶抑制物1:1抑制形成纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物（PIC）。所以TAT，TM，PIC，t-PAIC 都是静脉血栓形成过程中的重要标志物。

凝血酶-抗凝血酶复合物(Thrombin-Antithrombin Complex，TAT)作为凝血系统激活的分子标志物，提示凝血酶活化，血栓开始形成。正常参考区间：0-4ng/mL。升高会说明有DIC风险，DVT，PE以及心房颤动等其他凝血系统激活状态有关。TAT的检测具有以下临床意义：

1、证实凝血酶的生成，凝血系统启动的标志物;

2、提示DIC或排除DIC;

3、浓度升高可预估血栓的早期形成和程度;

4、抗凝治疗的效果判定，尤其是溶栓治疗后的再栓监测。

目前，市售有凝血酶-抗凝血酶复合物(Thrombin-Antithrombin Complex，TAT)测定试剂盒，其检测原理是：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被凝血酶-抗凝血酶复合物(Thrombin-Antithrombin Complex，TAT)ELISA测定试剂盒捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的凝血酶-抗凝血酶复合物(Thrombin-Antithrombin Complex，TAT)ELISA测定试剂盒呈正相关。此种试剂盒的性能特点是：1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，以解决现有技术中的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种检测凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，该试剂盒包括集成在试剂条上的反应缓冲液、清洗液、增强液、包被TAT抗体的磁微粒溶液、铕标记的羊抗人IgG抗体溶液，TAT的冻干校准品。