[发明专利]检测t-PAI-C的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及应用

说明书

本发明涉及一种生物检测试剂盒，特别涉及一种检测组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物‑1复合物（t‑PAI‑C）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及应用，属于免疫检测分析和纳米生物技术领域。一种检测组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物‑1复合物（t‑PAI‑C）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括：集成在试剂条上的反应缓冲液、清洗液、增强液、包被t‑PAI‑C抗原的磁微粒溶液、铕标记的羊抗人IgG抗体溶液，t‑PAI‑C的冻干校准品。本发明所述试剂盒可以提供一种接近均相的反应体系，检测t‑PAI‑C的含量，缩短检测时间，提高了效率，为临床使用提供便利。

技术领域

本发明涉及一种生物检测试剂盒，特别涉及一种检测组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1复合物（t-PAI-C）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及应用，属于免疫检测分析和纳米生物技术领域。

背景技术

静脉血栓形成的关键环节是凝血酶生成，凝血酶作用于纤维蛋白原转变成纤维蛋白而形成血栓。由于产生的凝血酶在血液中半衰期极短，只有几秒钟，很快被抗凝物质中和掉，故直接测定凝血酶非常困难，取而代之的是检测凝血酶和其抑制因子抗凝血酶(AT)1:1结合的凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)。TAT的产生直接证实了凝血系统的活化。血栓调节蛋白（TM）表达于血管内皮细胞表面，可以辅助凝血酶激活蛋白C系统产生抗凝效果，TM代表内皮细胞活化。当凝血活化，纤维蛋白形成后，纤维蛋白激活t-PA，活化的t-PA进一步活化纤溶酶原转化为纤溶酶，后者降解纤维蛋白形成D-二聚体和FDP。活化的t-PA被PAI-I 1:1抑制，形成组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1复合物（t-PAI-C），而活化的纤溶酶被α2-抗纤溶酶抑制物1:1抑制形成纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物（PIC）。所以TAT，TM，PIC，t-PAI-C 都是静脉血栓形成过程中的重要标志物。

纤维蛋白形成后纤溶系统会激活，形成组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）,进一步把纤溶酶原转化为纤溶酶，从而降解形成D二聚体和FDP，PAI-1是t-PA的生理性抑制剂，二者1：1结合形成复合物t-PAI-C，t-PAI-C水平与t-PA浓度及血管内皮损伤呈正相关。正常参考区间：男性：0-17ng/mL，女性：0-10.5 ng/mL，升高常见于DIC，血管内皮损伤，DVT，急性心肌梗死等。

组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1复合物（Tissue plasminogenactivator-Plasminogen activator inhibitor Complex ，t-PAI-C）综合反映纤溶系统和血管内皮细胞受损的分子标志物，提示病因未去除，血栓形成进行中。t-PAI-C的检测具有以下临床意义：

1、静脉血栓栓塞(VTE)的最佳诊断指标之一;

2、心肌梗死的风险指标;

3、判断术后血管内皮系统修复程度，监测血栓治疗药物效果。

目前没有可靠的商业化t-PAI-C检测方法，实验多使用ELISA测定试剂盒，其检测原理是：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被t-PAI-C抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的t-PAI-C含量呈正相关。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1复合物（t-PAI-C）的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，以解决现有技术中的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：