[发明专利]一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法

权利要求书

1.一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1:融合血浆通过冷沉淀离心去除凝血因子、脂蛋白；

S2:采用S/D法灭活去除制品中可能存在的病毒；

S3:采用C18吸附去除S/D溶剂；

S4:吸附和过滤去除脂蛋白和凝血因子；

S5:巴氏灭活。

2.根据权利要求1所述的一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法，其特征在于：

步骤S1中，按照国家要求取经过检疫期的合格血浆，在37℃水浴条件下解冻后降温至0～5℃离心处理，离心后的沉淀层用于冻存，收集上清层用于后续处理；

步骤S2采用有机溶剂处理，将步骤S1中收集的上清层用酸溶液调整pH值为7.20±0.40、用注射用水调整电导率为10ms/cm±2ms/cm，升温至25℃±2℃；添加磷酸三丁酯和Triton X-100，使磷酸三丁酯和Triton X-100的终体积浓度为1％；再升温至30℃±1℃，恒温4小时，恒温结束后降温至20～23℃得制品A；

步骤S3中，将制品A用终端为0.2μm过滤器过滤，然后上样至层析柱，上样流速不高于60cm/h，上样量不高于填料柱床体积的5倍，收集上样至层析柱后的流穿液；

步骤S4具体按如下方式处理：

A、AEROSIL吸附：将流穿液降温至2～4℃，根据流穿液体积，缓慢加入占流穿液体积2％-3％的气相二氧化硅，搅拌2小时，静置4小时；再对制品进行过滤得制品B；过滤前用注射用水冲洗和预冷深层滤器；

B、硅藻土吸附:将制品B降温至2～4℃，根据制品B体积加入占制品B体积1％的硅藻土，缓慢搅拌2小时，静置半小时后再进行过滤；过滤采用串联的DELP滤芯和终端为0.2μm的滤芯，过滤前用注射用水进行冲洗合格得制品C；

C、超滤透析：将制品C用sartorius10KD膜包浓缩蛋白浓度至10％，用3～7倍的10～15℃注射用水透析顶洗得制品D，制品D蛋白浓度＞10％，Na+含量＜160mmol/L；

步骤S5中，根据制品D溶液中总蛋白量，加入质量浓度为10％的葡萄糖至制品D中蛋白浓度为100g/L，并按制品中总蛋白的80％添加加辛酸钠至0.15～0.17Mm/g蛋白，完全溶解后用1.0mol/L酸溶液调整pH为7.0±0.4；升温至60±0.5℃、持续恒温10小时，加温过程中若温度偏离此范围，调整温度至此范围后，重新计时；恒温结束后然后降温至10～15℃得制品E；将制品E用sartorius10KD膜包浓缩蛋白浓度至10％，用3～7倍10～15℃注射用水透析，透析顶洗后蛋白浓度＞10％，Na+含量＜160mmol/L，葡萄糖含量≤5％。

3.根据权利要求2所述的一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法，其特征在于，步骤S5之后还包括配制灌装，按照最终配制后制品蛋白浓度不低于50g/L计算配制体积；根据配制体积计算葡萄糖的量，补加葡萄糖质量浓度至5％，并按照总蛋白的80％计算0.16mmol/g蛋白时辛酸钠的量，补加辛酸钠至0.16mmol/g，调整pH值7.00±0.4。

4.根据权利要求2所述的一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法，其特征在于，步骤S1中离心处理速度为10000～14000rpm/min，时间为20min。

5.根据权利要求2所述的一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法，其特征在于，步骤S2和步骤S5中所述酸溶液为0.5mol/L盐酸溶液。

6.根据权利要求2所述的一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法，其特征在于，步骤S3中所述层析柱上样前用C18填料填装，装填好的层析柱按照以下流程处理和上样：20％乙醇→1M醋酸→2M氯化钠→水→生理盐水→上样→生理盐水→40％乙醇→1M醋酸→2M氯化钠→8M尿素→95％乙醇→水→20％乙醇。

7.根据权利要求2所述的一种从新冠肺炎康复期血浆中制备灭活血清的方法，其特征在于，步骤S4中，采用离心的方式去除二氧化硅，离心的速度为4000r/min，时间为20min。