[发明专利]一种融合PNV靶向缺血心肌血管的干细胞药物及制备方法

权利要求书

1.一种融合PNV靶向缺血心肌血管的干细胞药物，其特征在于，其包括：心血管前体干细胞，所述心血管前体干细胞表面包被了血小板膜纳米囊泡PNV；所述心血管前体干细胞包含华通胶间充质干细胞WJMSCs、动脉外膜周细胞APC和动脉外膜Flk-1+细胞；所述血小板纳米囊泡为从新生儿脐带血血小板中提取；

其中，所述血小板纳米囊泡保留了血小板膜上糖蛋白受体，同时去掉了血小板膜内的凝血信号系统。

2.根据权利要求1所述的一种融合PNV靶向缺血心肌血管的干细胞药物，其特征在于，所述动脉外膜周细胞APC和动脉外膜Flk-1+细胞是以新生儿遗弃的脐带为材料来源，从脐动脉外膜中提取的人脐带动脉外膜Flk-1+细胞和人脐带动脉外膜周细胞APC。

3.根据权利要求2所述的一种融合PNV靶向缺血心肌血管的干细胞药物，其特征在于，在所述心血管前体干细胞中，人脐带动脉外膜周细胞APC、人脐带动脉外膜Flk-1+细胞、华通胶间充质干细胞WJMSCs三者按细胞数量比为1: 40-60 :80-120混合。

4.根据权利要求1所述的一种融合PNV靶向缺血心肌血管的干细胞药物，其特征在于，所述药物为注射液，所述注射液中还含有人血白蛋白，人血白蛋白在注射液中的质量浓度为0.2%~0.25%。

5.一种融合PNV靶向缺血心肌血管的干细胞药物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

S1: 血小板纳米囊泡PNV的制备；

S2: 心血管前体干细胞CVPSCs的制备;

所述心血管前体干细胞包含华通胶间充质干细胞WJMSCs、动脉外膜周细胞APC和动脉外膜Flk-1+细胞；

S3:采用步骤S1制备的血小板纳米囊泡PNV融合步骤S2制备的心血管前体干细胞CVPSCs，得到PNV-CVPSCs；

S4:以该PNV-CVPSCs制成干细胞药物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，血小板纳米囊泡PNV的制备过程如下：

S1-1: 以新生儿脐带血为材料来源，先采用离心方法除去红细胞，制备富血小板血浆，再加入EDTA和前列腺素E1（PGE1）的PBS溶液，再次离心，沉淀分离血小板，向血小板加入EDTA的PBS溶液，并与蛋白酶抑制剂混合，-80℃下储存；

S1-2: 室温解冻血小板3500-4500g离心，用含蛋白酶抑制剂的PBS溶液洗涤三次，用水重悬，使用水浴超声波仪在42kHz的频率和100W的功率超声处理4-6分钟后得到血小板纳米囊泡(PNV)，冻存。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1-2之后还包括：形态学检查、蛋白质印迹分析和免疫组化检测；

形态学检查是指对步骤S1-2的产物使用动态光散射和透射电子显微镜，根据形态学检查结果表征PNV的存在；

蛋白质印迹分析PNV的CD42b (GPIbα), CD41(GPIIb/IIIa）表达水平；

免疫组化检测PNV表面标志物 CD42b (GPIbα), CD41(GPIIb/IIIa）。