[发明专利]一种蛋清蛋白-Nisin纳米粒子抗菌剂制备方法

说明书

本发明公开了一种蛋清蛋白‑Nisin纳米粒子抗菌剂制备方法，以蛋清蛋白和乳酸链球菌素(Nisin)为主要原料，通过蛋白质加热变性凝胶的过程使蛋清蛋白和Nisin自组装形成纳米粒子，减少了其因环境因素造成的活性损失，不仅提高了Nisin的溶解度，而且增强了Nisin的稳定性和长效抑菌作用。所制备的纳米粒子具有乳化性强、分散性好、水溶性强、稳定性好、制备周期短、产率高、绿色安全等特点。

技术领域

本发明涉及抗菌剂及其制备方法，特别涉及一种蛋清蛋白-Nisin纳米粒子抗菌剂制备方法。

背景技术

乳酸链球菌素(Nisin)是由34个氨基酸组成的小阳离子肽，是一种天然食品防腐剂，被世界卫生组织和美国FDA认可、批准在食品中应用。Nisin的抗菌活性强，对革兰氏阳性菌抗菌谱广，并且作用机理研究较为成熟，常用在肉制品、乳制品、罐藏食品、酿造工业等。但是Nisin在应用过程中受到一定的限制，如：对革兰氏阴性菌抗菌谱窄、溶解性差、易被酶降解以及在高温条件下会失去部分活性等。所以要寻找一种能够改善Nisin的溶解性、抵抗酶攻击以及热稳定性。目前有将Nisin制成纳米颗粒或利用食品级壁材用于包埋Nisin制成纳米颗粒的报道。使用的技术各有不同，有优势也存在一些不足，如脂质体递送系统存在使用有机溶剂、成本高和不可控的分散性特点；壳聚糖-角叉菜胶和壳聚糖-聚谷氨酸递送系统方法较为复杂。

蛋清蛋白(Egg White Protein，EWP)具有优异的营养价值、可消化性、自组装和两亲性质，被认为是制备纳米级递送颗粒的理想材料。它可以提高分子的水溶性和生物利用度，保护包封组分免受酶攻击，控制释放速率和靶向递送能力，现已有关于蛋清蛋白作为递送载体的报道如递送姜黄素，胡萝ト素等功能性成分。本发明均采用绿色、安全的原材料，通过低成本、简单易操作的制备方法提高Nisin的稳定性。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供抗菌效果好、溶解性强的蛋清蛋白-Nisin纳米粒子抗菌剂制备方法。本发明通过将Nisin包裹在蛋清蛋白中，增强Nisin的溶解度和稳定性，从而提高其生物利用率，达到长效抗菌的目的。与此同时，也改善了蛋清蛋白的乳化性。

技术方案：本发明提供一种蛋清蛋白-Nisin纳米粒子抗菌剂制备方法，包括如下步骤：

(1)制备壁材：取蛋清蛋白粉溶解于去离子水中，离心、过滤，制备蛋清蛋白水溶液；

(2)制备蛋清蛋白-Nisin混合物：加入Nisin搅拌，得到蛋清蛋白-Nisin混合物；

(3)制备蛋清蛋白-Nisin凝胶：取搅拌后混合物加热使其凝胶化，冰浴、冷藏，制得蛋清蛋白-Nisin凝胶；

(4)超声均质；

(5)离心、取上清、过膜；

(6)冻干，制得蛋清蛋白-Nisin复合物粉末。

进一步地，所述步骤(1)中溶解后调节溶液pH为2-5，过滤后调节溶液pH为2-5。

进一步地，所述步骤(1)中离心条件为6000rpm-10000rpm，时间为10-20min。

进一步地，所述步骤(2)中，蛋清蛋白和Nisin的比例为4∶1-1∶2，Nisin的浓度为2.5-20mg/mL。

进一步地，所述步骤(3)中加热的条件为70-100℃，5-120min。

进一步地，所述步骤(4)中超声均质的条件为400W-900W，1-60min。

进一步地，所述步骤(5)中离心的条件为3000-5000rpm，时间是5-15min。

有益效果：本发明具有如下优势：