[发明专利]一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法

权利要求书

1.一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法，其特征是，

1)前处理

称取十字花科蔬菜匀浆样品于离心管中，加入pH 5.2磷酸缓冲液，混匀，置于20-30℃水解，然后加入乙酸乙酯萃取，离心，取上层有机相，置于旋蒸瓶中，再重复萃取1-2次，合并萃取液，利用旋转蒸发仪浓缩至近干，用甲醇水溶液定容，过滤膜，得到试样溶液待HPLC分析测定；

2)HPLC分析的色谱条件

色谱柱：C18色谱柱，规格：250mm×4.6mm，5μm；

流动相A：0.1％磷酸-水溶液；流动相B：乙腈；

莱菔素检测波长：225nm；萝卜硫素检测波长：254nm；

柱温：30℃；

流速：1mL/min；

进样量：10μL；

3)标准曲线建立

配制萝卜硫素和莱菔素的标准工作溶液，以保留时间定性，外标法定量，通过标准工作液的浓度与相应的峰面积绘制标准曲线；

4)检测

试样溶液HPLC测定，以保留时间定性，外标法定量，以试样溶液中萝卜硫素或莱菔素的峰面积代入标准曲线，从而得到相应的萝卜硫素或莱菔素的浓度。

2.如权利要求1所述的一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法，其特征是，所述梯度洗脱条件如下：

3.如权利要求1所述的一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法，其特征是，所述的十字花科蔬菜包括萝卜、大白菜、西兰花、小白菜、卷心菜。

4.如权利要求1所述的一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法，其特征是，所述步骤1)的甲醇水溶液为：按体积比，甲醇:水＝7:3。

5.如权利要求1-4中任一项所述的一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法，其特征是，所述步骤1)前处理为：称取十字花科蔬菜匀浆样品1.000g于50mL离心管中，加入pH 5.2磷酸缓冲液3mL，混匀，置于25℃水解1h，然后加入乙酸乙酯40mL，萃取30min，以4500r/min离心5min，取上层有机相，置于旋蒸瓶中，再重复萃取2次，合并萃取液，利用旋转蒸发仪浓缩至近干，用1mL甲醇水溶液定容，过0.22μm滤膜，待HPLC分析测定。