[发明专利]一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法

说明书

本发明提供了一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法。该方法将十字花科蔬菜中的萝卜硫素和莱菔素先经过pH 5.2磷酸缓冲液水解，用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后定容，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪分别在波长254nm和225nm处测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。本方法所采用的仪器目前在各个实验室中应用广泛，易于推广，具有较强的适用性，对于提升蔬菜产品的营养品质和保健功能具有重要意义，同时为十字花科蔬菜的育种和相关基因克隆提供理论依据。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，具体的说是一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法。

背景技术

萝卜硫素和莱菔素均属于异硫氰酸脂类物质，是目前公认的防癌抗癌效果最好的天然产物之一，对肝癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、前列腺癌和胃癌有明显的阻断作用。此外，萝卜硫素和莱菔素还具有抗炎抑菌、提高机体抗氧化能力和免疫力等药理作用。因此，萝卜硫素和莱菔素被视为评价十字花科蔬菜品质和营养保健价值的重要指标。

然而，目前尚未建立十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素含量的分析检测方法。CN201410239297.7公开了一种萝卜硫素提取物中萝卜硫素的HPLC定量检测方法，该方法不需要对萝卜硫素提取物进行前处理且仅仅检测萝卜硫素一种化合物，其检测方法较为简单，不适合十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素含量的检测。因此，亟需制定出一套基于HPLC技术的检测十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素含量的检测方法，对于提升蔬菜产品的营养品质和保健功能具有重要意义，同时为十字花科蔬菜的育种和相关基因克隆提供理论依据。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法。该方法将十字花科蔬菜中的萝卜硫素和莱菔素先经过磷酸缓冲液水解，用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后定容，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪分别在波长254nm和225nm处测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。本方法所采用的仪器目前在各个实验室中应用广泛，易于推广，具有较强的适用性，对于提升蔬菜产品的营养品质和保健功能具有重要意义，同时为十字花科蔬菜的育种和相关基因克隆提供理论依据。

本发明的技术方案是：一种HPLC法测定十字花科蔬菜中萝卜硫素和莱菔素的方法，其特征是，

1)前处理

称取十字花科蔬菜匀浆样品于离心管中，加入pH 5.2磷酸缓冲液，混匀，置于20-30℃水解，然后加入乙酸乙酯萃取，离心，取上层有机相，置于旋蒸瓶中，再重复萃取1-2次，合并萃取液，利用旋转蒸发仪浓缩至近干，用甲醇水溶液(甲醇:水＝7:3(V/V))定容，过滤膜，得到试样溶液待HPLC分析测定；

2)HPLC分析的色谱条件

色谱柱：C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，或性能相当者；

流动相A：0.1％磷酸-水溶液；流动相B：乙腈；

检测波长：225nm(莱菔素)；254nm(萝卜硫素)；

柱温：30℃；

流速：1mL/min；

进样量：10μL；

梯度洗脱条件，见表1；

3)标准曲线建立

配制萝卜硫素和莱菔素的标准工作溶液，以保留时间定性，外标法定量，通过标准工作液的浓度与相应的峰面积绘制标准曲线；

4)检测

试样溶液HPLC测定，以保留时间定性，外标法定量，以试样溶液中萝卜硫素或莱菔素的峰面积代入标准曲线，从而得到相应的萝卜硫素或莱菔素的浓度。