[发明专利]外泌体在制备治疗肺纤维化的药物中的应用

权利要求书

1.外泌体在制备治疗肺纤维化的药物中的应用，所述外泌体为iPS细胞的外泌体、MSC细胞的外泌体和EPC细胞的外泌体按质量比为1：1：1或1：2：1的混合物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述外泌体的剂量为20µg/kg体重。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述iPS细胞的外泌体的制备方法是：取iPS细胞，置于含5%体积的O₂和5%体积的CO₂、温度为37℃的培养箱中，分别在24h和48h换液，收集上清液，分离，得到iPS细胞的外泌体；所述MSC细胞的外泌体的制备方法是：取MSC细胞，置于含5%体积的O₂和5%体积的CO₂、温度为37℃的培养箱中，分别在24h和48h换液，收集上清液，分离，得到MSC细胞的外泌体；所述EPC细胞的外泌体的制备方法是：取EPC细胞，置于含5%体积的O₂和5%体积的CO₂、温度为37℃的培养箱中，分别在24h和48h换液，收集上清液，分离，得到EPC细胞的外泌体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述iPS细胞的培养方法是：（1）采集外周血单核细胞，经培养扩增稳定后，进行质粒电转，将重编程组合质粒一同转入成纤维细胞或外周血单核细胞中，随后接种到培养板中，置于37℃、5%CO₂培养箱内培养；（2）按照外周血单核细胞重编程培养流程进行培养操作，定期更换重编程完全培养基，至iPS形成较大克隆开始挑取单克隆，转移至24孔板中逐代扩增，即得到iPS细胞。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述MSC细胞的培养方法是：取健康新生儿的新鲜脐带，用PBS将脐带冲洗干净，剔去血管，剥出华氏胶组织，将剩余组织充分剪碎至1mm³大小，加入α-MEM培养液，于37℃、5% CO₂培养箱中培养，待细胞长满后，用质量百分数为0.25%的胰蛋白酶消化传代；加PBS调整细胞浓度至1×10⁶/mL，即得到MSC细胞。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述EPC细胞的制备方法是：（1）取iPS，接种于基底膜基质预处理后的细胞培养板中，置于37℃、5%CO₂培养箱中，静置过夜；（2）iPS铺种一天后，更换中胚层诱导培养基，置于37℃、5%CO₂细胞培养箱中孵育，维持3天不换液直至侧板中胚层细胞形成；（3）更换EPC细胞诱导培养基，将细胞培养板放回37℃、5%CO₂培养箱中，孵育24h后重复换液操作，再将细胞培养板放回37℃、5%CO₂培养箱中，再孵育24h，即得到EPC细胞。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括外泌体和药物可接受的载体或赋形剂。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为外用制剂或者口服制剂。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述外用制剂为喷雾剂或气雾剂；所述口服制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂和囊泡剂中的任意一种。