[发明专利]Gustavus基因及其应用、由其合成的dsRNA及dsRNA的制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种Gustavus基因及其应用、由其合成的dsRNA及dsRNA的制备方法与应用，Gustavus基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，dsRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。dsRNA的制备方法：以Gustavus基因的DNA序列为模板，合成Gustavus基因片段；Gustavus基因片段作为模板，设计含有T7启动子序列的引物对；通过PCR扩增得到所述dsRNA合成模板；体外合成dsRNA。Gustavus基因是与昆虫繁殖相关的正向调控因子。通过dsRNA技术，使得蚜虫生殖细胞在发育过程中出现障碍，无法形成正常的胚胎从而达到降低蚜虫种群数量的目的。

技术领域

本发明涉及基因工程和植物保护技术领域，尤其涉及Gustavus基因及其应用、dsRNA及dsRNA的制备方法与应用。

背景技术

蚜虫 (aphid)，隶属于动物界（Animalia）节肢动物门（Arthropoda）六足亚门（Subphylum Hexapoda）昆虫纲（Insecta）有翅亚纲（Pterygota）半翅目（Hemiptera）胸喙亚目（Sternorrhyncha）。别名腻虫、蜜虫等。蚜虫是广食性害虫，寄主植物约有50科近400种。蚜虫主要分布在北半球温带地区和亚热带地区，热带地区分布很少。我国各省均有分布。蚜虫生活周期短、繁殖量大、为害性强，除刺吸植物体内汁液外，其分泌蜜露可以粘附在植物叶片表面，阻碍植物正常的生理活动并诱发多种病害，同时蚜虫还是多种植物病毒的传播媒介，是一种重要的农业害虫。

化学药剂防治农业害虫具有收效快，防治效果显著，使用方便，受地区和季节性的限制小，可以大面积使用，便于机械化和杀虫范围广等优点，是目前主要的害虫防治手段。但长期广泛使用化学农药，易造成害虫产生抗药性，有害昆虫再猖獗和误杀有害昆虫的天敌等问题，同时，长期广泛大量使用化学农药，易污染大气、水域、土壤，对人畜健康造成威胁，甚至中毒死亡。因此，开发环境友好、低毒高效的蚜虫防控方法是对于经济发展、社会进步和食品安全具有重要意义。

RNA干扰（RNAi）是由双链RNA（dsRNA）诱发同源mRNA高效特异性降解的基因沉默机制。由于RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，因此，基于RNAi技术的害虫防治策略具有高度的专一性，对非靶标生物安全。寻找关键的分子靶标基因并获得特异高效的dsRNA片段序列是基于RNAi技术害虫防控策略核心。相较于化学农药，RNA干扰技术使用生物学手段，有效避免环境污染，是一种绿色、友好、可持续的害虫防治手段。

蚜虫繁殖能力强，易形成高密度种群，产生的危害性更大。控制蚜虫种群密度可以有效降低危害程度，这一特点为蚜虫防控提供了契机，大幅降低蚜虫繁殖力甚至使其不育成为防控蚜虫的理想策略之一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种Gustavus（以下简称Gus）基因及其应用、由其合成的dsRNA及dsRNA的制备方法与应用。

为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种Gus基因，所述Gus基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

上述的Gus基因，进一步的，Gus基因以桃蚜的cDNA为模板，以Primer01和Primer02为引物，进行PCR扩增得到。

上述的Gus基因，进一步的，Primer01的DNA序列如SEQ ID NO.4所示，所述Primer02的DNA序列如SEQ ID NO.5所示。

基于一个总的技术构思，本发明提供了一种所述Gus基因的防控蚜虫中的应用。

基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种所述的Gus基因合成的dsRNA，所述dsRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。

基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种所述的dsRNA的制备方法，包括以下步骤：