[发明专利]一种胶类药材的检测方法

权利要求书

1.一种胶类药材的检测方法，其特征在于：将待检测的胶类药材样品用胰蛋白酶进行酶切后，将酶解液注入液质联用仪，采用ESI正离子模式，多反应监测模式进行检测，如果检测出与专属性多肽保留时间、母离子-子离子一致，则判定所述胶类药材样品的物种来源与专属性多肽对应的物种一致；并根据专属性多肽的峰面积比值，判断掺杂样品的掺伪比例；具体包括：

取待检测胶类药材样品10 mg，加入5 ml磷酸盐缓冲液，超声使样品完全溶解，12000rpm离心20 min，取上清液150 μl，置于2 ml离心管中，以1 ml 50 mM PBS稀释，加入适量胰蛋白酶，摇匀，充分酶解，加入10% TFA溶液60 μl终止反应，12000 rpm离心20 min，即得胶类药材酶解液，置于-20℃保存，备用；

色谱柱为1.7μm C₁₈反相色谱柱，规格2.1 mm × 100 mm，流速0.3ml/min，流动相A相为乙腈，流动相B为0.1%甲酸，0~5 min，5~25%A线性梯度洗脱，5~6 min，25~5%A线性梯度洗脱，6~7 min，5%A洗脱；

电喷雾正离子模式ESI+，质谱参数为：离子源温度500℃；电离电压5500V；脱溶剂温度500℃；离子源气体1，60psi；离子源气体2，60psi；选择专属肽对应的离子对进行检测；

专属肽的离子对及质谱条件为：

鹿肽1：m/z724.9/2+→802.4, 去簇电压DP=10~150, 碰撞能量CE=10~50；

鹿肽2：m/z765.2/3+→554.4, DP=10~150, CE=10~50；

鹿肽3：m/z765.5/3+→554.4, DP=10~150, CE=10~50；

鹿肽4：m/z765.8/3+→554.9, DP=10~150, CE=10~50；

鹿肽5：m/z670.9/3+→531.4, DP=10~150, CE=10~50；

驴肽1：m/z724.8/2+→818.4, DP=10~150, CE=10~50；

驴肽2：m/z768.0/3+→694.5, DP=10~150, CE=10~50；

驴肽3：m/z518.5/4+→556.3, DP=10~150, CE=10~50；

马肽1：m/z524.1/4+→556.3, DP=10~150, CE=10~50；

牛肽1：m/z746.9/2+→846.5, DP=10~150, CE=10~50；

牛肽2：m/z755.0/3+→553.4, DP=10~150, CE=10~50；

猪肽1：m/z739.9/2+→818.5, DP=10~150, CE=10~50；

猪肽2：m/z736.0/3+→526.4, DP=10~150, CE=10~50。

2.根据权利要求1所述的胶类药材的检测方法，其特征在于，所述胶类药材包括鹿皮胶、鹿角胶、黄明胶、阿胶、马皮胶、猪皮胶，以及以这些胶类药材生产制备的含胶类的食品、保健品。

3.根据权利要求1所述的胶类药材的检测方法，其特征在于，加入胰蛋白酶的量w/v为0.1%~10%。

4.根据权利要求1所述的胶类药材的检测方法，其特征在于，酶解方式包括：37℃恒温酶解、微波辅助酶解、超声辅助酶解或酶固定化酶解。