[发明专利]一种胶类药材的检测方法

说明书

本发明公开了一种胶类药材的检测方法，本发明采用胰蛋白酶酶切胶类药材，使专属性多肽从胶原蛋白中释放，而后采用液相色谱‑三重四极杆质谱仪检测，如果检测出与专属性多肽保留时间、母离子‑子离子一致，则判定所述胶类药材样品的物种来源与专属性多肽对应的物种一致；并根据专属性多肽的峰面积比值，可判断掺杂样品的掺伪比例。该方法具有专属性强、灵敏度高、操作简单等优点，可用于胶类药材的鉴别与质量控制。

技术领域

本发明涉及一种胶类药材的检测方法，具体涉及胶类药材的真伪、掺假样品检测及掺假比例。

背景技术

胶类药材包括阿胶、鹿皮胶、鹿角胶、黄明胶等，80％以上的成分为不同类别的胶原蛋白，包括I型胶原α1链(COL1A1)、I型胶原α2链(COL1A2)、II型胶原α1链(COL2A1)、III型胶原α1链(COL3A1)等，其中以COL1A2来源的肽段为主。COL1A2作为高保守蛋白质，广泛存在于不同动物种体内，是构成胶类药材的重要蛋白类成分之一。

在现有市场上存在假阿胶、假鹿皮胶等胶类药材伪品，并以次充好向市场销售，严重影响了广大人民群众的饮食和用药安全。目前不法企业常以马皮、牛皮、猪皮等掺杂制备阿胶、鹿皮胶、鹿角胶等来以次充好，导致名贵胶类药材的造假事件屡禁不止的原因之一，缺少简单、可行、准确的鉴定技术支持，动物皮经过熬制后，很难鉴别出动物皮的来源。因此，寻找专属性、准确高的方法来快速准确鉴定胶类药材及其制品真伪意义重大。

现代研究表明，通过对胶类药材中胶原蛋白酶切后获得专属性肽段，以专属性肽段来鉴别胶类药材的真伪，如以驴源专属肽段鉴定阿胶的真伪，以鹿源专属肽段鉴定鹿皮胶的真伪等。本发明通过串联质谱方法检测专属离子对，可准确区分鹿皮胶、阿胶、牛皮胶、马皮胶、猪皮胶。该方法为胶类药材质量研究提供了参考与依据，有利于胶类药材及其制品质量标准进一步完善。

发明内容

发明目的：本发明提供了一种检测胶类专属成分的方法，可快速准确判断鹿皮胶、阿胶、牛皮胶、马皮胶、猪皮胶的真伪及掺杂情况，所述方法专属性强、灵敏度高、操作简单，可用于胶类药材的鉴别与质量控制。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提出一种检测胶类药材的方法，其特征在于：将待检测的胶类药材样品用胰蛋白酶进行酶切后，将酶解液注入液质联用仪，以待检测的胶类药材酶解液为基质，分别加入不同物种的专属性多肽对照品，采用ESI正离子模式，多反应监测(MRM)模式，对专属性多肽的母离子与子离子进行检测，如果检测出与专属性多肽对照品保留时间、母离子-子离子一致，则判定所述胶类样品的物种来源于专属性多肽的对应物质一致。

本发明所述胶类药材包括鹿皮胶、鹿角胶、黄明胶、阿胶、马皮胶、猪皮胶，以及以这些胶类药材生产制备的含胶类的食品、保健品等。

本发明所述的酶切方法如下进行：取待检测胶类药材样品约10mg，加入5ml磷酸盐缓冲液，超声使样品完全溶解，12000rpm离心20min，取上清液150μl，置于2ml离心管中，以1ml50mMPBS稀释，加入适量胰蛋白酶，加入胰蛋白酶的量介于0.1％～10％(w/v)，摇匀，充分酶解，酶解方式包括：37℃恒温酶解、微波辅助酶解、超声辅助酶解、酶固定化酶解，酶解后加入10％TFA溶液60μl终止反应，12000rpm离心20min，即得胶类药材酶解液，置于-20℃保存，备用。

本发明所述的液质联用仪检测的液相条件为：色谱柱为1.7μmC18反相色谱柱(2.1μm ×100mm)，流速0.3ml/min，流动相A(乙腈)，流动相B(0.1％甲酸)，0～5min，5～25％A线性梯度洗脱，5～6min，25～5％A线性梯度洗脱，6～7min，5％A洗脱。液质联用仪检测的质谱条件为：电喷雾正离子模式(ESI+)，质谱参数为：离子源温度500℃；电离电压5500V；脱溶剂温度500℃；离子源气体1，60psi；离子源气体2，60psi。选择专属肽对应的离子对进行检测。

本发明专属肽的离子对及质谱条件为：