[发明专利]一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，其特征在于，所述预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法包括以下步骤：

步骤一，对服用药物的胃肠间质瘤患者进行静脉血抽取；

步骤二，用酚氯仿法抽提基因组DNA提取；使用试剂盒中PCR反应组件，依据单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物，设定PCR扩增的反应体系和反应条件，进行PCR扩增；

所述用酚氯仿法抽提基因组DNA提取包括：

(2.1)将血液中加入800μl的抽提缓冲液，摇匀，形成匀浆状；将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入800ul的Proteinase K以及4ul蛋白酶K，55℃水浴保温过夜；

(2.2)加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min；

(2.3)于4℃下离心8min，取上清液，再利用按1：1混合的酚与氯仿在此进行抽提，并离心；

(2.4)取离心后的上清液加入等体积的氯仿和异戊醇；

(2.5)取上清液加入2倍体积的冷冻后的无水乙醇，混合均匀；离心；

(2.6)利用冷冻后的70％的乙醇对离心沉淀洗涤3次，即可得高纯度的基因组DNA；

步骤三，使用试剂盒中的PCR产物纯化组件，设定PCR纯化反应体系和反应条件，利用PCR纯化试剂进行PCR纯化；

所述设定PCR纯化反应体系和反应条件包括：

设定PCR纯化反应体系为总体积30ul，包含PCR产物26ul，1U/ul SAP酶1.0ul；10U/ulExoI酶0.5ul；dd H₂O 4.125ul；

在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为37℃反应20min，68℃反应20min；

步骤四，使用检测试剂盒中的PCR测序组件，依据DNA测序引物，设定PCR测序体系和测序条件，反应结束后放入测序仪进行PCR测序；

所述设定PCR测序体系和测序条件包括：

反应总体系为5ul，包括PCR纯化产物1ul，25％BigDyemix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；ddH₂O 2ul；

在扩增仪上进行反应，反应条件为98℃反应2min，后25个循环96℃反应30s，55℃反应1min，60℃反应5min；

步骤五，依据测序结果，分析服用药物的胃肠间质瘤患者胃肠间质瘤游离肿瘤细胞情况，由此得到该药物对胃肠间质瘤的影响与否的结论。

2.如权利要求1所述的预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤一中，所述服用药物的胃肠间质瘤患者服用的药物为伊马替尼和舒尼替尼中的一种或是两种的组合物。

3.如权利要求1所述的预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤二中，所述设定PCR扩增的反应体系包括：

设定PCR扩增的反应体系为：10×反应缓冲液2.0ul；10mM dNTPmix 1.0μl；5U/ul TaqDNA聚合酶0.15ul；DNA模板1ul；20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul；ddH₂O补足20ul；

设定PCR扩增的反应条件为：94℃4min变性酶激活，95℃30sec变性，50℃30sec退火，72℃1min延伸；25个循环，最后69℃延长3min。