[发明专利]一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用

说明书

本发明属于生物化学分析技术领域，公开了一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用，包括PCR反应组件、PCR产物纯化组件、PCR测序组件封板覆膜、产品说明书；所述预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法包括：对服用药物的胃肠间质瘤患者进行静脉血抽取；用酚氯仿法抽提基因组DNA提取；设定PCR扩增、纯化、测序的反应体系和反应条件，反应结束后进行PCR测序；分析服用药物的胃肠间质瘤患者胃肠间质瘤游离肿瘤细胞情况，得到该药物对胃肠间质瘤的影响与否的结论。本发明提供的试剂盒设计合理，能够实现对胃肠间质瘤游离肿瘤细胞的精确获取，由此得到胃肠间质瘤耐药性与否的结论，使用方便且成本低。

技术领域

本发明属于生物化学分析技术领域，尤其涉及一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用。

背景技术

目前，胃肠间质瘤(GastrointestinalStromalTumors，GIST)是一类起源于胃肠道间叶组织的肿瘤，占消化道间叶肿瘤的大部分，由于肿瘤对常规放疗不敏感，手术切除曾是治疗GIST唯一有效的方法，对于肿瘤进展转移或术后复发而失去手术机会的患者，其中位生存期仅6-18个月，5年生存率小于10％。本世纪以来，随着现代分子生物学技术在GIST临床诊断治疗中的广泛应用，尤其以伊马替尼为代表的分子靶向药物的出现和普及，使GIST患者的预后得到显著改善。靶向治疗成为肿瘤治疗的热门，目前，伊马替尼用于治疗晚期GIST及GIST术后辅助治疗的显著疗效以得到广泛共识，但同时伊马替尼的原发性和继发性耐药问题也日益受到研究者关注，成为近期GIST研究的热点。目前，伊马替尼和舒尼替尼是用于治疗GIST的主要靶向药物，伊马替尼，酪氨酸激酶抑制剂，是一种小分子蛋白激酶抑制剂，它具有阻断一种或多种蛋白激酶的作用。临床用于治疗慢性髓性白血病和恶性胃肠道间质肿瘤。舒尼替尼可用于治疗伊马替尼失败或不能耐受的胃肠间质瘤(GIST)、不能手术的晚期肾细胞癌(RCC)、不可切除的，转移性高分化进展期胰腺神经内分泌瘤(pNET)成年患者。伊马替尼和舒尼替尼都能作为假底物与ATP竞争性结合KIT/PDGFRA受体的酪氨酸激酶位点，发挥阻滞激酶激活和信号传导的作用，此外，舒尼替尼还具有抗肿瘤血管形成的作用，虽然靶向药物的治疗明显改善了GIST的预后，约80％的患者在最初接受伊马替尼治疗后获益，但靶向药物耐药是不可避免的，耐药问题成为靶向治疗中的棘手问题。研究发现，有40-50％的患者在接受伊马替尼治疗后2年内出现耐药，发生伊马替尼耐药的患者如接受舒尼替尼治疗，其约11个月无进展生存期。耐药可分为原发性耐药和继发性耐药，前者是指用药后疾病仍然进展或疾病稳定小于6个月者，后者是指经治疗病情稳定6个月之后再次发生的疾病进展。对于肿瘤耐药性的预测，可有助于靶向药物的选择，对于患者的恢复有很大的帮助。但是目前市场上暂无进行胃肠间质瘤耐药性预测的试剂盒，无法实现对胃肠间质瘤耐药性的预测，对胃肠间质瘤治疗药物的选择无指导意义。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前市场上暂无进行胃肠间质瘤耐药性预测的试剂盒，无法实现对胃肠间质瘤耐药性的预测，对胃肠间质瘤治疗药物的选择无指导意义。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用。

本发明是这样实现的，一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，所述预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法包括以下步骤：

步骤一，对服用药物的胃肠间质瘤患者进行静脉血抽取；

步骤二，用酚氯仿法抽提基因组DNA提取；使用试剂盒中PCR反应组件，依据单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物，设定PCR扩增的反应体系和反应条件，进行PCR扩增；

所述用酚氯仿法抽提基因组DNA提取包括：

(2.1)将血液中加入800μl的抽提缓冲液，摇匀，形成匀浆状；将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入800ul的ProteinaseK以及4ul蛋白酶K，55℃水浴保温过夜；