[发明专利]一种花毛茛再生体系的方法

权利要求书

1.一种诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基，其特征在于，所述培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA 2.4-2.8mg/L、NAA 0.5～1.0mg/L。

2.权利要求1所述培养基在建立花毛茛再生体系中的应用。

3.一种建立花毛茛再生体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以消毒后的花毛茛块茎为外植体，将所述外植体接种于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得分化不定芽；所述芽诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖30g/L、琼脂7g/L、6-BA 2.5～3.5mg/L、NAA 0.2～0.4mg/L；

(2)将所述分化不定芽接种至芽增殖培养基上进行第一壮芽培养，得带块茎的幼苗；所述壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA 1.8-2.2mg/L、NAA 0.2-0.3mg/L；

(3)分离幼苗后的块茎接种于所述诱导花毛茛产生愈伤组织的培养基上进行愈伤诱导培养，得愈伤组织；

(4)将所述愈伤组织接种于所述增殖培养基上进行增殖培养，获得大量愈伤组织；

(5)将所述愈伤组织接种于所述芽诱导培养基上进行分化培养，得愈伤不定芽；

(6)将所述愈伤不定芽接种于不定芽壮芽培养基上进行第二壮芽培养，得带块茎的愈伤分化苗；所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA 1.5-2.0mg/L、NAA 0.1-0.2mg/L；

(7)将所述带块茎的愈伤分化苗接种于壮苗和生根共培养培养基上进行共培养，得花毛茛再生苗；所述壮苗和生根共培养培养基以MS为基本培养基，还包括：蔗糖40g/L、琼脂7g/L、6-BA 1.8-2.2mg/L、NAA 0.4-0.8mg/L和IBA 2.0-3.0mg/L。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(1)所述芽诱导培养的温度为21±1℃，光照强度为3000～4000lx，光照时间为12h/d，所述芽诱导培养的时间为30～40d。

5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(2)所述第一壮芽培养的温度为21±1℃，光照强度为300～400μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d；所述第一壮芽培养的时间为60～90d。

6.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(3)所述愈伤诱导培养的温度为21±1℃，光照强度为300～400μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d；所述愈伤组织增殖的时间为30-60d。

7.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(4)所述愈伤增殖培养的温度为21±1℃，暗培养。

8.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(5)所述分化培养的温度为21±1℃，光照强度为300～400μmol·m^-2·s^-1，光照时间为12h/d；所述分化培养的时间为20-21d。

9.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(6)所述第二壮芽培养的温度为21±1℃，光照强度为300～400μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h/d；所述第一壮芽培养的时间为30～60d。

10.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(7)所述共培养的温度为21±1℃，光照强度300～400μmol·m^-2·s^-1，光照时为12h/d；所述共培养的时间为30～35d。