[发明专利]产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白及其制备方法、应用和疫苗

权利要求书

1.一种产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白的制备方法，其特征在于，包括将含有编码产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白的基因克隆至载体，得到重组载体；然后将重组载体转化至大肠杆菌，筛选后将重组载体阳性克隆经金黄色葡萄球菌RN4220转化，将重组载体转化进入表皮葡萄球菌中，然后经诱导表达得到所述产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白；

所述编码产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述载体包括pYL质粒载体，所述pYL质粒载体是将Xyl/tet片段、ori区域和Erm抗性基因插入pRB373质粒的多克隆位点及抗性区域中，得到的重组pYL质粒载体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，诱导表达的条件为使用终浓度为300～700ng/mL的诱导剂ATC在36～38℃诱导16～36小时。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，使用终浓度为400ng/mL的诱导剂ATC在37℃诱导36小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，表皮葡萄球菌的种子液接种量为0.1～5％(v/v)。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，表皮葡萄球菌的种子液接种量为0.5％(v/v)。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，表皮葡萄球菌的补料碳源包括葡萄糖和/或甘油。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，表皮葡萄球菌的补料碳源为甘油。

8.权利要求1-7任一项所述的产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白的制备方法在如下(x1)～(x3)中至少一种的应用；

(x1)制备产气荚膜梭菌基因工程疫苗；

(x2)制备产气荚膜梭菌病诊断抗原；

(x3)制备单克隆抗体。

9.疫苗，其特征在于，包含权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白；

所述疫苗包含权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白和佐剂；

所述佐剂为ISA35A佐剂。

10.根据权利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白的浓度为25～75μg/mL。

11.根据权利要求10所述的疫苗，其特征在于，所述产气荚膜梭菌ε毒素突变体蛋白的浓度为50μg/mL。