[发明专利]一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法

权利要求书

1.一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，包括以下步骤：

1)将手术中取下的带骨膜颅骨瓣置入保存液C中，冷链运输至十万级的无菌操作间或超洁净无菌操作台，所述带骨膜颅骨瓣包括手术中咬下的颅骨碎块，所述保存液C为含有抗生素的甘油溶液或代血浆胶体溶液；

2)在无菌操作环境下，用等渗盐水清洗血迹，并剔除除骨膜之外的软组织，清理干净后用2％碘伏溶液浸泡30分钟，再用75％酒精清洗脱碘，最后再用等渗盐水冲洗干净并用无菌纱布擦干；

3)在无菌操作环境下，在颅骨内板上磨孔，到达颅骨外板停止，不穿破外板；

4)磨钻下来的颅骨碎与重组人骨形态发生蛋白质-2及载体材料混合，回填至骨孔并等待固化；

5)固化完成后各钻孔处外口用骨腊涂抹封堵，操作完成后的骨瓣在无菌操作环境下用紫外线照射；

6)将照射完成后的骨瓣置入无菌保存盒A中，同时取一小块颅骨置入另一无菌保存盒B中，均倒入保存液D浸没并密封，所述保存液D为添加有抗生素和细胞防冻液的培养基溶液；

7)将保存盒A内的骨瓣先冷却到0℃，转入-20℃冷箱冷冻6～8小时，再转入-40℃冰箱冷冻24～48小时后沉入液氮中保存，对保存盒B内的小颅骨块及保存液进行细菌培养检查，并对小颅骨块进行骨细胞形态检测，若检测为无菌且骨细胞形态符合使用要求，则表示保存盒A内的骨瓣也为无菌且骨细胞形态符合使用要求，可用于植入。

2.根据权利要求1所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，步骤1)中，将手术中取下的带骨膜颅骨瓣置入盛有保存液C的保存盒中进行冷链运输。

3.根据权利要求1所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，所述保存液C中含有的抗生素包括庆大霉素，左氧氟沙星，万古霉素，青霉素和链霉素。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，所述甘油溶液中含有重量百分比为10％～75％的甘油，包括甘油果糖和甘油果糖氯化钠；所述代血浆胶体溶液包括右旋糖苷和羟乙基淀粉。

5.根据权利要求1所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，步骤3)中，磨孔的直径4mm～6mm，间隔4cm～6cm。

6.根据权利要求1所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，步骤4)中，每mg颅骨碎与0.3mg～0.5mg重组人骨形态发生蛋白质-2，1mg载体材料混合。

7.根据权利要求1或6所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，所述载体材料由重量比为1：1：1的羟基磷灰石、卵磷脂及药用明胶组成。

8.根据权利要求1所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，步骤5)中，照射剂量为100000～500000uW.s/CM²。

9.根据权利要求1所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，所述保存液D中添加的抗生素包括庆大霉素，左氧氟沙星，万古霉素，青霉素和链霉素。

10.根据权利要求1或9所述的一种含rhBMP-2带骨膜自体颅骨瓣的保存方法，其特征在于，所述保存液D包括含10％～20％二甲基亚砜的M199培养基溶液，含10％～20％甘油的DMEM培养基溶液。