[发明专利]一种猪传染性胃肠炎病毒的RT-CPA检测引物和试剂盒

说明书

本发明提供了一种猪传染性胃肠炎病毒的RT‑CPA检测引物和试剂盒，属于猪病毒病类病毒检测技术领域，包括SD‑CPF、SD‑CPR、SD‑F、SD‑R、SD‑DF和SD‑DR；核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～6所示。本申请提供的引物特异性好，能有效检测出猪传染性胃肠炎病毒；快速高效，检测时间约90min，非常适用于TGEV的现场快速检测；不依赖昂贵的仪器设备和专业检测人员，检测成本低；检测结果判定简单、客观、直观；灵敏度高，可检测至10copies/μL的TGEV。

技术领域

本发明属于猪病毒病类病毒检测技术领域，尤其涉及一种猪传染性胃肠炎病毒的RT-CPA检测引物和试剂盒。

背景技术

猪传染性胃肠炎于1946年由Doyle和Hutchings在美国首次报道，以后许多国家和地区相继有本病发生和流行。我国从20世纪50年代末期就有该病的报道，2001年以来猪传染性胃肠炎在我国部分地区时有发生和流行，给养猪业造成一定危害。近几年由传染性胃肠炎引起的保育舍仔猪腹泻更为普遍，严重影响仔猪生长健康，特别是1～4周龄仔猪大量死亡，给养殖户带来巨大经济损失。猪传染性胃肠炎(TGE)是一种世界范围内流行的疾病，世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类疾病中必检的传染病。因此，做好TGE的检测与监控工作是控制TGEV传播的首要工作。

目前，TGEV检测的常规方法有病毒的细胞分离鉴定、电镜观察、ELISA、中和试验、核酸探针杂交、免疫电子显微镜技术(IEM)、血清学试验、核酸探针和聚合酶链反应(PCR)等方法。传统的病毒分离鉴定方法尽管可以作为确诊该病的最终诊断依据，但其操作时间长，过程复杂，不适于快速检测要求。IEM、核酸探针和PCR等技术具备敏感性高及特异性强等优点，但对试验条件要求比较高，需要昂贵的仪器设备和专业技术人员，且操作相对复杂，检测成本高，只有专业检测实验室才能配备，基层单位难以开展。这些方法都有各自的局限性，为了及早发现和确诊猪传染性胃肠炎，有必要建立一种准确、快速、灵敏的检测方法，为疾病的诊断与防控提供技术手段，也为养猪业的健康发展提供技术保障。TGEV感染的分子流行病学调查和早期诊断是降低TGEV流行风险、减少猪传染性胃肠炎发病导致巨额经济损失的有效手段，因此建立简单、快速、高灵敏的检测方法，并开发适用于现场应用的TGEV检测试剂盒显得尤为重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种猪传染性胃肠炎病毒的RT-CPA检测引物和试剂盒，采用本发明提供的检测引物能够快速、准确、高灵敏地检测猪传染性胃肠炎病毒。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种猪传染性胃肠炎病毒的RT-CPA检测引物，包括SD-CPF、SD-CPR、SD-F、SD-R、SD-DF和SD-DR；

所述SD-CPF的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述SD-CPR的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述SD-F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述SD-R的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

所述SD-DF的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；

所述SD-DR的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

本发明还提供了一种检测猪传染性胃肠炎病毒的试剂盒，包括上述技术方案所述的RT-CPA检测引物。

优选的，所述试剂盒还包括ReactionBuffer、BstDNA聚合酶、AMV逆转录酶、dNTPs、Betaine和MgSO₄。

优选的，所述试剂盒还包括核酸检测试纸条。