[发明专利]一种高效贯序诱导巨噬细胞体外极化的方法

权利要求书

1.一种高效贯序诱导巨噬细胞体外极化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1扩增增殖培养：使用10％FBS的RPMI1640培养基对THP-1细胞进行扩增增殖培养；

S2诱导前预处理，使用含HPL的PBS和培养基对THP-1细胞进行诱导前处理；

S3细胞分化处理：在5％HPL的RPMI1640培养基中，采用低浓度的PMA缓慢诱导THP-1细胞，使其贴壁分化为M0巨噬细胞，然后去除PMA；

S4细胞诱导极化：在5％HPL的RPMI1640培养基中，使用LPS/IFN-γ诱导M0巨噬细胞72小时以上，使之极化为M1；或者使用IL-4/IL-13诱导M0巨噬细胞72小时以上，使之极化为M2巨噬细胞。

2.根据权利要求1所述的高效贯序诱导巨噬细胞体外极化的方法，其特征在于，在扩增增殖培养阶段，所述RPMI1640培养基除含有10％FBS外，还含有0.05nM的β-巯基乙醇，以确保THP-1细胞的活性和高增殖未分化状态。

3.根据权利要求1所述的高效贯序诱导巨噬细胞体外极化的方法，其特征在于，诱导前预处理的方法为：先用含HPL的PBS对THP-1细胞进行重悬离心，再用含HPL的RPMI1640培养基对THP-1细胞进行重悬离心。

4.根据权利要求1所述的高效贯序诱导巨噬细胞体外极化的方法，其特征在于，在THP-1细胞分化M0的处理阶段，PMA的浓度为5nmol，贴壁分化时间为48h，并且不含β-巯基乙醇。

5.根据权利要求1所述的高效贯序诱导巨噬细胞体外极化的方法，其特征在于，在M0极化为M1/M2巨噬细胞的诱导极化阶段，采用含5％HPL、1％青链霉素和1％两性霉素的RPMI1640培养基培养，并且不含β-巯基乙醇，诱导时间需大于等于72小时。

6.根据权利要求5所述的高效贯序诱导巨噬细胞体外极化的方法，其特征在于，THP-1分化为M0和M0极化为M1/M2阶段，采用低浓度的HPL，即RPMI1640培养基中的HPL的浓度均为5％。