[发明专利]检测猪圆环病毒4型的引物探针组、试剂盒与iiPCR方法

权利要求书

1.检测猪圆环病毒4型的引物探针组，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的PCV4上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的PCV4下游引物和核苷酸序列如SEQID NO.3所示的PCV4探针，所述PCV4探针的5’端修饰有荧光报告基团，3’端修饰有猝灭基团。

2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、HEX、JOE、NED、TAMRA、CY3、ROX或CY5。

3.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述猝灭基团包括BHQ。

4.基于权利要求1～3任一项所述引物探针组的检测猪圆环病毒4型的试剂盒，所述试剂盒包括：酶混合液和含权利要求1～3任一项所述引物探针组的PCR反应液；所述酶混合液包括0.5U/μL的Taq DNA聚合酶、20mM的Tris-HCl、0.05mM的EDTA、0.05mM的DTT、体积百分含量为40％的甘油和体积百分含量为0.2％的Tween-20；所述PCR反应液包括：20μM的上游引物、20μM的下游引物、10μM的探针、10mM的Tris-HCl、5mM的dNTPs和ddH₂O。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为荧光热对流PCR试剂盒。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，每40μL所述试剂盒的反应体系包括15μL的酶混合液、20μL的PCR反应液和5μL的待测样品。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述待测样品的来源包括血清、组织、粪便和环境拭子。

8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应条件为：上孔温度95℃，下孔温度60℃，反应时间30分钟。