[发明专利]一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法

权利要求书

1.一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法，该方法包括如下步骤：

（1）精密吸取50~200μL待测血浆样本于1.5 mL离心管中，加入4~10倍体积内标萃取溶液以沉淀蛋白，涡旋振荡1~3 min后，于2~5℃条件下以10000~15000 rpm的速度离心5~10min，取上清液备用；

（2）取步骤（1）的上清液进行高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）分析，分析条件如下：

色谱条件：色谱柱为长度×内径×粒径为250×4.6mm×3μm 的Chiralpak IG-3色谱柱并加长度×内径×粒径为10 mm×4.0 mm×3μm的保护柱，柱温为25℃；流动相为质量分数为0.2%的甲酸铵/甲醇溶液，流速为0.5 mL/min，运行总时长为40 min；进样体积10 μL；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源；离子化方式：ESI+；检测模式：MRM模式；离子源温度（TEM）：500 ℃；电喷雾电压（IS）：5500 V；气帘气（CUR）：2.4×10⁵ Pa；碰撞气（CAD）：4.1×10⁴ Pa；离子源气流GS1：3.4×10⁵ Pa；离子源气流GS2：4.1×10⁵ Pa；入口电压（EP）：10 V；射出电压（CXP）：10 V；目标化合物和内标的MRM质谱检测参数如下：

（3）采用内标标准曲线法定量计算样品中目标物的含量，其中所述内标标准曲线法为：配制含有目标物的系列标准工作溶液，加入内标烟碱-d3、可替宁-d3、可替宁氮氧化物-d3和降可替宁-d4，以各标准工作溶液中目标物与其内标的定量离子峰面积比为纵坐标，以各标准工作溶液中目标物的含量为横坐标制作标准工作曲线；将步骤（2）的分析结果代入标准曲线中，得到待测溶液中的目标物含量，再进一步计算得到样品中各目标物的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述内标萃取溶液为各内标的甲醇溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述内标萃取溶液浓度为20~50 ng/mL。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述系列标准工作溶液中各目标物的浓度范围为0.5~250 ng/mL，定量下限均为0.5 ng/mL。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述血浆为人体或动物血浆。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述动物血浆为大鼠或小鼠血浆。