[发明专利]一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法

说明书

本发明涉及一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法，该方法包括如下步骤：(1)取血浆加入内标萃取溶液以沉淀蛋白，振荡，离心，得上清液；(2)取步骤(1)得到的上清液进行高效液相色谱‑串联质谱(HPLC‑MS/MS)分析；(3)采用内标标准曲线法定量计算样品中目标物的含量。该方法实现了烟碱及其主要代谢物的同时手性分析，具有通量高、分离度好、操作简便、灵敏度高、回收率及重复性好等优点，适合血浆样本中烟碱及其主要代谢物的手性分析。

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法。

背景技术

烟碱是烟草及烟草制品具有潜在致瘾性的决定性因素和主要药理活性物质，其在动物及人体内可以很快地代谢成各种产物，主要代谢产物有可替宁、降可替宁、可替宁氮氧化物等。烟碱、可替宁、降可替宁和可替宁氮氧化物都有两个对映异构体：S-烟碱、R-烟碱，S-可替宁、R-可替宁，S-降可替宁、R-降替宁和S-可替宁氮氧化物、R-可替宁氮氧化物。对映异构体虽然分子式相同，但结构不同，因此其代谢机理和生物活性一般具有较大的差异。生物样本中对映异构体的手性分析是研究目标物药理学及毒性等生理作用的关键，因此，建立血浆样本中烟碱及其代谢物的高通量、高灵敏度、高选择性的手性分离方法对烟碱的代谢、积累及吸烟与健康研究具有重要意义。

目前，烟碱及其代谢物的手性分离的方法主要有液相色谱(LC)法、液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)、超临界流体色谱(SFC)法、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)法、毛细管电泳(CE)法等，而液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)具有快速、灵敏、重现性好、通量高等优点，在生物碱手性分离方面有广阔的应用前景。但是，相关研究主要为烟草及烟草制品，极少涉及生物样品，且没有同时实现血浆样本中烟碱及其主要代谢物可替宁、降可替宁、可替宁氮氧化物等的手性分离(Drug Test.Anal.2017,9(6),944-948.Talanta 2018,181,132-141.Heliyon.2019,5(5),e01719.)

发明内容

本发明的目的正是基于上述技术不足，建立了一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法，该方法使用HPLC-MS/MS技术，首次实现了血浆样本中烟碱、可替宁、降可替宁、可替宁氮氧化物的同时手性分离，具有通量高、分离度好、操作简便、灵敏度高、回收率及重复性好等优点，适合血浆样品中烟碱及其主要代谢物的手性分析。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法，该方法包括如下步骤：

(1)取血浆，加入内标萃取溶液以沉淀蛋白，振荡，离心，得上清液；

(2)取步骤(1)得到的上清液进行高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析；

(3)采用内标标准曲线法定量计算样品中目标物的含量。

优选地，在步骤(1)中，所述内标萃取溶液为各内标的甲醇溶液。

优选地，在步骤(1)中，所述内标萃取溶液浓度为20～50ng/mL。

优选地，在步骤(1)中，所述离心的温度为2～5℃。

优选地，在步骤(1)中，所述离心的速度为10000～15000rpm。

优选地，在步骤(2)中，所述高效液相色谱-串联质谱分析的色谱条件包括：色谱柱为Chiralpak IG-3色谱柱(250×4.6mm×3μm)联合保护柱(10mm×4.0mm×3μm)。

优选地，在步骤(2)中，所述高效液相色谱-串联质谱分析的色谱条件还包括：柱温为25℃；流动相为质量分数为0.2％的甲酸铵/甲醇溶液；流速为0.5mL/min；运行总时间为40min；进样体积为10μL。